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申请/专利权人：华中农业大学
摘要：本发明公开了一种草鱼ctnnb1基因过表达慢病毒的构建及其在提高鱼类肝细胞糖利用能力中的应用。本发明通过构建含有编码β‑catenin蛋白的ctnnb1基因的重组慢病毒，获得草鱼ctnnb1过表达慢病毒，该慢病毒能高效地感染L8824细胞并将ctnnb1序列成功导入宿主细胞的基因组，获得能稳定过表达ctnnb1的重组草鱼肝细胞系L8824‑β‑catenin。过表达ctnnb1能有效提高草鱼肝细胞对糖的利用能力，通过活体实验验证了ctnnb1表达水平与草鱼肝脏利用糖的能力相关，从而为研究提高鱼类肝脏利用糖的能力提供了有效的靶标，对提高鱼类的生产性能和减低水产饲料成本具有重大意义。
主权项：1.一种草鱼ctnnb1基因过表达慢病毒的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：1ctnnb1基因过表达慢病毒载体的构建a.以草鱼全长cDNA为模板，采用下述ctnnb1PCR扩增引物，通过PCR反应，扩增获得ctnnb1CDSPCR产物；其中，PCR扩增ctnnb1引物如下：ctnnb1上游引物：atagaagacaccgactctagaatggctacccaatctgacttgatg；ctnnb1下游引物：ctcaccatggtggcgaccggtcagatcggtatcaaaccaggc；b.pLV-eGFP慢病毒表达载体通过限制性内切酶为XbaⅠ和AgeⅠ进行双酶切，得到线性化的pLV-eGFP慢病毒表达载体；c.将ctnnb1PCR产物与线性化的pLV-eGFP慢病毒表达载体进行重组，将得到的重组产物转化进新鲜的感受态大肠杆菌细胞，即得到含目的基因的pLV-eGFP-ctnnb1慢病毒载体；2草鱼ctnnb1基因过表达慢病毒的构建将上述pLV-eGFP-ctnnb1慢病毒载体、以及慢病毒包装辅助载体pSPAX2质粒和pMD2.G质粒同时共转染入人胚胎肾细胞HEK293T细胞中，在该细胞中进行病毒的包装，包装好的病毒会被分泌到细胞外的培养基中，收集培养基，将培养基离心后取得上清液，上清液经过过滤、离心浓缩后即为草鱼ctnnb1基因过表达慢病毒。
全文数据：
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百度查询： 华中农业大学 草鱼ctnnb1基因过表达慢病毒的构建及其在提高鱼类肝细胞糖利用能力中的应用
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