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申请/专利权人:防灾科技学院
摘要:本发明提供了一种获得葛藤外植体愈伤组织的方法,包括以下步骤:1选取葛藤茎段和茎尖作为外植体,进行接种前的处理和消毒;2将外植体在愈伤组织诱导培养基中诱导培养,进行愈伤组织诱导,初代培养时间为28d“d”是“天”的简称,以下直接采用“d”;3将葛藤愈伤组织转移至愈伤组织继代培养基中继代培养,进行愈伤组织增殖,继代培养时间为21d;所述愈伤组织诱导培养基包括2,4‑二氯苯氧乙酸、6‑苄氨基嘌呤、萘乙酸;所述愈伤组织继代培养基包括6‑苄氨基嘌呤和萘乙酸。本发明提供的方法操作简单,成本低,效率高,有利于良种快速育苗,为后期规模化生产的应用提供参考。
主权项:1.一种提高葛藤愈伤组织诱导率的方法,其特征在于,包括以下步骤:1外植体选择和消毒:从当地生、无病虫害、长势良好的葛藤植株上采取带芽茎段,用干燥且干净的毛刷刷去表面尘土之后,先用75%的酒精溶液处理,然后用0.1%的HgCl2溶液浸泡,无菌水冲洗5次后,将茎段切为1cm-2cm或直接切取茎尖,作为愈伤组织诱导的外植体材料;2愈伤组织的诱导培养:将步骤1中获得的茎段或茎尖接种于愈伤组织诱导培养基上,放入培养室进行愈伤组织诱导初代培养,每个培养瓶接种1个外植体,待诱导出黄绿色愈伤组织后,统计其诱导周期和诱导率;3愈伤组织的继代培养:将步骤2中获得的愈伤组织切取生长状况良好、无褐变的愈伤组织,将其移至愈伤组织增殖培养基中进行继代培养,待培养至21d后,统计愈伤组织增殖率和增殖系数。4愈伤组织诱导培养条件:植物组织细胞培养各阶段的基本培养基为MS+5.5g·L-1琼脂+25g·L-1蔗糖,PH值为5.8-6.0;各阶段培养条件为:温度25±2℃,光照时长为14h·d-1,光照强度为3500-4000lux。
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