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摘要:本发明公开了一种桑树MnGAD基因克隆方法、GAD原核表达方法、GABA生产方法,涉及基因工程技术领域,将桑树MnGAD基因连接T克隆载体上,转化进入大肠杆菌,挑选阳性克隆并测序;将目的片段连接到pET‑28a+上;设计特异性引物,添加同源臂;以测序正确的T克隆载体为模板进行新的克隆,并回收产物:将pET‑28a+‑MnGAD转化到大肠杆菌表达菌株BL21DE3感受态细胞中,采用PCR法鉴定阳性克隆;挑选阳性菌液,加入到带有Kan抗性的LB液体培养基,37℃培养;然后接种于LB液体培养基,37℃培养至OD600值在0.7,加入IPTG至终浓度为0.5mmolL,在16℃下培养16h,最后对所收集菌体处理后进行SDS‑PAGE分析。GABA生产方法具有特异性高、条件温和、转化效率高、污染小、安全性高且分离提纯方便等特点。
主权项:1.一种桑树MnGAD基因克隆方法,其特征在于,包括以下步骤:以川桑枝条上的冬芽提取总RNA,将提取的总RNA进行反转录合成cDNA第一链,作为PCR扩增的模板,扩增后得到桑树MnGAD基因,具有1506bp基因片段,核苷酸序列如序列1。
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百度查询: 西南大学 桑树MnGAD基因克隆方法、GAD原核表达方法、GABA生产方法
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