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申请/专利权人：河南农业大学
摘要：一种鉴定PGPR趋化根系分泌物到达根际的趋化速率的方法及其应用。本发明属于微生物领域，涉及植物促生根际细菌的趋化物，特别是指一种鉴定PGPR趋化不同趋化物到达根际速率的方法及其应用。本申请的方法可以实现区分PGPR趋化某种趋化物时的趋化速率和在根表的繁殖速率，通过比较PGPR某种趋化物的趋化受体缺失株与野生型和回补株趋化速率的差异，如果缺失株的趋化速率显著低于野生型和回补株，即可确定该趋化物是PGPR在根际趋化定殖的强趋化物。
主权项：1.一种鉴定PGPR趋化根系分泌物到达根际的趋化速率的方法，其特征在于，步骤为：（1）从微生物基因组的注释中查找该微生物的胞外配体结合域，筛选能够识别胞外趋化物的趋化受体，利用分子对接技术将趋化受体与根系分泌物成分进行分子对接，并计算结合自由能，筛选自由能值低的根系分泌物成分作为候选趋化物；（2）根据候选趋化物确定与候选趋化物对应的受体蛋白，以微生物的基因组DNA为模板，构建含有受体蛋白的胞外配体结合域片段的表达载体和敲除受体蛋白的重组载体；所述步骤（2）中根据候选趋化物确定与候选趋化物对应的受体蛋白是先利用毛细管趋化方法测定微生物趋化阈浓度值，确定该微生物对趋化物的响应强度，再采用荧光热漂移法和平板趋化法进一步鉴定该候选强趋化物的受体蛋白；（3）将含有步骤（2）的重组载体的大肠杆菌通过接合方法转入微生物中获得趋化受体敲除突变株；（4）以微生物的基因组DNA为模板，构建步骤（2）中候选趋化物对应的受体蛋白的回补质粒和回补空载质粒，分别转入步骤（3）的趋化受体敲除突变株中，获得趋化受体敲除突变株的回补株和回补空载株；（5）将微生物、趋化受体敲除突变株、趋化受体敲除突变株的回补株和回补空载株与候选趋化物先进行平板趋化实验验证受体蛋白与趋化物的对应性，再利用微环境系统测定微生物、趋化受体敲除突变株和趋化受体敲除突变株的回补株在小麦根际的趋化速率和增殖速率。
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