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申请/专利权人：南京农业大学

摘要：本发明公开了一种利用功能土著菌群固体菌剂去除环境中PAEs的方法，包括以下步骤：S1、土著微生物菌群富集、驯化；S2、菌悬液的制备；S3、固体菌剂的制备；S4、PAEs的去除；S5、降解特性验证；本发明以具有PAEs高效降解能力的功能土著菌群为对象，选取400～600℃热解条件下制备的雪松生物炭为固定化载体，采用吸附法，制备具有PAEs降解能力的功能土著菌群固体菌剂，对环境中PAEs具有较高的去除率。本产品安全有效，对环境友好，处理成本较低，适合大量推广。

主权项：1.一种利用功能土著菌群固体菌剂去除环境中PAEs的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、土著微生物菌群富集、驯化按照0.04~0.06gmL的质量浓度向锥形瓶中加入受PAEs污染的土壤样品与无菌水，随后将锥形瓶置于摇床中，在30~35℃的温度条件下，以150~200rpm的转速避光震荡培养6~8h取出，静置2h后，得到的上清液即为土著微生物菌液；按照体积比为4~6：94~96称取所述土著微生物菌液与含PAEs的无机盐培养基，然后将土著微生物菌液转接至含PAEs的无机盐培养基中，加入PAEs混标，使培养基中PAEs浓度达到设定值，然后在30℃的温度条件下，以150rpm的转速在摇床上震荡培养5~7d，相同条件下连续富集培养5代后，获得稳定的具有高效降解PAEs能力的功能土著微生物菌群L-3，采用甘油保藏法进行保藏；S2、菌悬液的制备将功能土著微生物菌群L-3接种于LB培养基中活化，菌群活化方法为：在28~32℃的温度条件下，以150~200rpm的转速恒温震荡培养12~16h；再于4~6℃的温度条件下以5000~8000rpm的转速离心4~6min后收集菌体并弃去上清液，然后用无机盐培养基冲洗菌体后，再次离心并弃去上清液，清洗两次后将细菌的OD600值调整到1.0作为菌群悬液，在4℃的温度下暂存备用；S3、固体菌剂的制备使用生物炭作为固定化载体；所述固定化载体的制备方法为：1）将园林废弃物雪松自然晒干，用水清洗2~3次，先在100~110℃烘箱中杀青25~35min，然后50~60℃的温度下烘烤24h，粉碎15~20min后过40目筛，得到粉碎后的雪松，备用；并对雪松进行活化处理；雪松活化处理步骤为：1）先用质量浓度为0.5~1.5%的壳聚糖与纳米SiO2按照体积比为1：0.2~0.3混合后得到的混合液对粉碎后的雪松进行3~5次喷雾处理；然后按照固液比为3~5gmL将处理后的雪松置入到质量浓度为1.5~2.0molL的活化溶液中，并在超声条件下浸渍1.5~3h，过滤掉浸泡滤液后取出并放入真空环境内，并利用氮气对粉碎后的雪松表面吹扫至干燥；所述活化溶液按质量百分比计，由70~80%的Na2CO3、10~15%的FeCO3、2.5~4.5%的（NH4）2HPO4以及余量的蒸馏水组成；2）取粉碎后的雪松置于坩埚中，压实并盖上坩埚盖，置于气氛炉中，密封并打开氮气阀门，往炉内通10~15min氮气；3）以5~8℃min的升温速率调节气氛炉内温度为250~300℃，然后再以10~15℃min的升温速率调节气氛炉内温度为400~600℃，恒温炭化1.5~2.5h后以5~8℃min的降温速率降至300~350℃，然后再以10~15℃min的降温速率降至室温后将生物炭取出，即得到炭化粗产物；4）对冷却后的炭化粗产物进行称量，计算生物炭的产率，球磨并通过60目筛进行过筛处理，得到炭材料；5）将步骤4）中获得的炭材料先用质量浓度为0.05~0.15%的HCl溶液进行清洗，接着用超纯水冲洗3~5次后烘干，即可获得固定化载体；称取固定化载体置于锥形瓶中灭菌后冷却至常温，按照固液比1:10gmL的比例加入菌群悬液，并置于恒温震荡培养箱中，在30℃的条件下，以150~200rpm的转速培养24h后取出，随后在离心机中以8000rpm的速率离心处理5~10min后，得到上清液和下层固体，弃去上清液然后用灭过菌的无机盐培养基洗涤下层固体，再离心5~10min后弃上清液；重复此过程2~3次，置于灭过菌的烘箱中以25~30℃的温度烘干，最终所得固体即为功能土著微生物菌群固体菌剂；S4、PAEs的去除将步骤S3获得的固体菌剂按照5~6gL的配比加入到污染体系中对PAEs进行去除。

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百度查询： 南京农业大学 一种利用功能土著菌群固体菌剂去除环境中PAEs的方法