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申请/专利权人：东莞市滨海湾中心医院(东莞市太平人民医院、东莞市第五人民医院)
摘要：本发明公开了一种Pdgfrβ基因特异性敲除小鼠模型及其构建方法与应用，属于转基因技术领域。本发明的Pdgfrβ基因特异性敲除小鼠模型的构建方法包括以下步骤：基于CRISPRCas9技术设计靶向Pdgfrβ基因的sgRNA；对Pdgfrβ基因进行flox修饰，构建同源重组载体；将Cas9蛋白、sgRNA和同源重组载体共注射至小鼠的受精卵中；将受精卵移植至假孕母鼠体内，产出F0代，对F0代进行基因型鉴定，筛选阳性F0小鼠；将阳性F0小鼠与野生型小鼠交配并进行基因型鉴定，获得F1代杂合子；将F1代杂合子与两个不同的特异性工具鼠配繁，筛选获得所述Pdgfrβ基因神经组织以及全身组织特异性敲除的两个小鼠模型。本发明的Pdgfrβ基因特异性敲除小鼠模型的构建方法步骤简单，方法易行，周期短并且得到阳性小鼠的概率高。
主权项：1.一种Pdgfrβ基因特异性敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1基于CRISPRCas9技术设计靶向Pdgfrβ基因的sgRNA；2对Pdgfrβ基因进行flox修饰，构建同源重组载体；3将Cas9蛋白、sgRNA和同源重组载体共注射至小鼠的受精卵中；4将步骤3的受精卵移植至假孕母鼠体内，产出F0代，对F0代进行基因型鉴定，筛选阳性F0小鼠；5将阳性F0小鼠与野生型小鼠交配并进行基因型鉴定，获得F1代杂合子；6将F1代杂合子与特异性工具鼠配繁，筛选获得所述Pdgfrβ基因特异性敲除小鼠模型；所述sgRNA的作用位点位于Pdgfrβ基因的4-7号外显子的两侧；所述sgRNA作用位点的DNA序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示；所述对Pdgfrβ基因进行flox修饰具体为flox与不同特异性Cre结合后，能组织特异性敲除Pdgfrβ基因第4-7外显子；所述flox修饰位点的DNA序列如SEQIDNo.3和SEQIDNo.4所示；所述步骤4和步骤5的基因型鉴定的引物序列包括SEQIDNo.5和SEQIDNo.6、SEQIDNo.7和SEQIDNo.8中的至少一对。
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