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申请/专利权人：江南大学

摘要：本发明公开了一种同时检测谷物中AFB1和Cd的双联荧光免疫定量试纸条，属于免疫分析快速检测技术领域。本发明中制备双联荧光免疫定量试纸条的方法，包括如下步骤：将0.01‑1.0mgmLAFB1完全抗原溶液涂到硝酸纤维素膜上作为检测线T1，将0.1‑1.0mgmLCd完全抗原溶液涂到硝酸纤维素膜上作为检测线T2，将0.05‑1mgmL羊抗鼠二抗溶液涂到硝酸纤维素膜上作为质控线C，干燥；之后将样品垫、含有检测线、质控线的硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在PVC底板上组装成试纸条。本发明的双联荧光免疫定量试纸条具有灵敏度高、成本低廉、操作简便、快速定量检测、稳定性好，市场前景广阔，易推广使用。

主权项：1.一种同时检测谷物中AFB1和重金属Cd的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）将谷物粉碎过筛，得到粉碎后的谷物；按照体积比为85：15，将甲醇和浓度为1.2molL硝酸水溶液混匀，得到提取液；将1g粉碎后的谷物、Cd标品、AFB1标品混合均匀，之后与1mL提取液混合后加入到固相萃取柱中，在25℃下超声提取25min，离心去除不溶性物质，得到含有Cd和黄曲霉毒素B1的待测加标溶液；（2）将待测溶液、Eu3+-荧光微球标记的AFB1的单克隆抗体、Eu3+-荧光微球标记的Cd的单克隆抗体和PBS缓冲液按照体积比5：3：5：87混合均匀，在37℃孵育15min，得到预处理的待测溶液；（3）将预处理的待测溶液加入双联荧光免疫定量试纸条的样品垫上，37℃层析15min，加样量为50μLcm2；之后利用免疫定量分析仪测定样品检测线T1、T2和质控线C处相应的荧光强度值：AFB1的T1值、Cd的T2值和C值；（4）将得到的C值、T1值、T2值代入AFB1和Cd的标准曲线，得到待测样品中AFB1和Cd的浓度；其中，AFB1的标准曲线是根据AFB1标准品浓度的对数值与T1T0×100（%）之间的线性关系拟合得到，其中，T0表示浓度为0ppb标准液的T1线荧光值，其他加标浓度的检测线T1为T1；Cd的标准曲线是根据Cd标准品浓度的对数值与T2T0×100（%）之间的线性关系拟合得到，其中，T0表示浓度为0ppb标准液的T2线荧光值，其他加标浓度的检测线T2为T2；当AFB1的浓度为0.01-30ngmL时，AFB1浓度的对数值与T1T0成线性关系，线性方程为Y=-25.531Logx+42.719，x为AFB1浓度，Y为T1T0，R2=0.9946，检测限可达到0.021ngmL；重金属Cd的浓度范围为0.01-60ngmL时，其浓度对数值与TT0呈线性关系，线性方程为Y=-21.009Logx+59.428，x为Cd浓度，Y为T2T0，R2=0.9955，检测限可达到0.024ngmL；其中：步骤（3）中的双联荧光免疫定量试纸条的制备方法，包括如下步骤：将0.1mgmLAFB1完全抗原溶液涂到硝酸纤维素膜上作为检测线T1，将0.3mgmLCd完全抗原溶液涂到硝酸纤维素膜上作为检测线T2，将0.05mgmL羊抗鼠二抗溶液涂到硝酸纤维素膜上作为质控线C；其中，检测线T1和检测线T2之间的距离为5mm，检测线T1和质控线C的距离为5mm，检测线T2和质控线C在检测线T1的两边，干燥；之后将样品垫、含有检测线和质控线的硝酸纤维素膜、吸水纸依次粘贴在PVC底板上组装成试纸条；样品垫叠在含有检测线、质控线的硝酸纤维素膜上，二者重叠3mm，吸水纸叠在含有检测线、质控线的硝酸纤维素膜上，二者重叠3mm；检测线T2距离样品垫的距离为5mm，质控线C距离吸水纸的距离为5mm；用切条机将粘贴好的板切成约4mm宽的试纸条，得到同时检测谷物中AFB1和Cd的双联荧光免疫定量试纸条。

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百度查询： 江南大学 一种同时检测谷物中AFB1和Cd的双联荧光免疫定量试纸条