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申请/专利权人：江苏医药职业学院
摘要：本发明涉及一种第452位络氨酸磷酸化PI3Kp85抗体的制备方法，包括抗原的制备、免疫、亲和层析柱的制备以及抗体的制备为保证后期多肽交联载体蛋白以及肽亲和纯化，在多肽链C末端增加一个L‑半胱氨酸进行封闭，最终确定PI3Kp85的序列为KLHEYpNTQFQE；制备过程中采用两步法亲和纯化，先通过磷酸化层析柱，再通过非磷酸化层析柱做亲和去除；本发明的第452位络氨酸磷酸化PI3Kp85抗体的制备方法，所制备的抗体能识别PI3Kp85第452络氨酸被磷酸化的状态，不识别非磷酸化状态，具备磷酸化特异性高，亲和力高的特点，比传统的ProteinA纯化更加高效。
主权项：1.一种第452位络氨酸磷酸化PI3Kp85抗体的制备方法，包括抗原的制备、免疫、亲和层析柱的制备以及抗体的制备，其特征在于，利用Abdesigner软件对PI3Kp85的氨基酸序列进行抗原表位分析，分析内容包括亲水性、抗原性、表面可能性、柔性区评估，同时考虑氨基酸结构复杂程度、易氧化程度、合成难度、氨基酸类别和分布，为保证后期多肽交联载体蛋白以及肽亲和纯化，在多肽链C末端增加一个L-半胱氨酸进行封闭，最终确定PI3Kp8抗原表位多肽的序列为KLHEYpNTQFQE；所述多肽通过半胱氨酸与KLH偶联；制备过程中采用两步法亲和纯化，先通过磷酸化层析柱，再通过非磷酸化层析柱做亲和去除；所述免疫阶段的方法如下：c1.基础免疫：将需免疫的羊从笼子中抓出放在操作台上，皮下注射8－10个部位，每个部位注射0.3－0.5ml乳化合格的抗原；c2.加强免疫:除背部皮下免疫5个点外，增加注射两个肌肉位点，每个部位注射0.1－0.3ml抗原；c3.血清收集:采集两次检测用血，第一次加强免疫后第七天采集检测血A，第二次加强免疫后七天采集检测血B；第三次加强免疫后七天采集阳性血后留样作为检测血清；c4.将收集的检测血A和检测血B离心后分离血清。
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权利要求：
百度查询： 江苏医药职业学院 第452位络氨酸磷酸化PI3Kp85抗体的制备方法和使用方法
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