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摘要：本发明属于植物组织培养技术领域，公开一种粉花大花蒂牡花叶片高效离体再生技术。所述方法包括如下步骤：取叶片转接到诱导培养基上进行愈伤组织诱导及愈伤组织的不定芽诱导培养，不定芽通过增殖培养，生根培养和炼苗和移栽，得到大花蒂牡花容器苗。本发明粉花大花蒂牡花无菌种子苗带叶柄的叶片为外植体的高效离体再生技术具有操作简单，成本低，可用于大规模生产。同时为粉花大花蒂牡花细胞工程和基因工程育种奠定基础，具有广阔的应用前景。

主权项：1.一种大花蒂牡花叶片高效离体再生方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）种子灭菌；（2）获得无菌实生苗：将步骤（1）消毒后的种子接种到萌发培养基上，获得无菌实生苗；（3）愈伤组织诱导培养：将步骤（2）获得的无菌实生苗取出，切下叶片，叶片造伤后转接到诱导培养基上进行诱导愈伤组织培养，得到愈伤组织；其中，所述的诱导培养基是MS+ZT0.8~1.3mgL+NAA0.1~0.4mgL+蔗糖30gL+卡拉胶8gL，pH为5.8～6.2；（4）增殖培养：将步骤（3）获得的愈伤组织用无菌刀片切成团块，转接到增殖培养基上进行增殖培养，通过转接，得到大量愈伤组织；其中，所述的增殖培养基为MS+ZT0.9~1.25mgL+NAA0.2~0.4mgL+蔗糖30gL+卡拉胶8gL，pH为5.8～6.2；（5）不定芽分化培养：将步骤（4）获得的愈伤组织接种于不定芽分化培养基上进行培养，从愈伤组织上分化出不定芽；其中，所述的不定芽分化培养基为MS+6-BA1.3~2.3mgL+NAA0.2~0.4mgL+蔗糖30gL+卡拉胶8gL，pH为5.8～6.2；（6）不定芽壮苗培养：将步骤（5）分化出带不定芽的愈伤组织接种于不定芽壮苗培养基上进行培养，获得生长健壮的不定芽；其中，所述的不定芽壮苗培养基为MS+6-BA0.1~1.0mgL+NAA0.01~0.2mgL+蔗糖30gL+卡拉胶8gL，pH为5.8～6.0；（7）生根培养：将步骤（6）得到的不定芽中切取生长状态良好的顶芽转接到生根培养基上进行生根培养，得到组培生根苗；其中，所述的生根培养基为MS+NAA0.1~1.0mgL+蔗糖30gL+卡拉胶8gL，pH为5.8～6.2，培养时间为20~30d；（8）炼苗和移栽：将步骤（7）得到的组培生根苗移到温室炼苗，炼苗完成后移栽到混合基质中，得到大花蒂牡花容器苗。

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