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申请/专利权人：河南省商业科学研究所有限责任公司;河南省科学院

摘要：本发明涉及食品安全检测技术领域，具体涉及一种谷物中T‑2毒素单分子水平定量检测方法。将待测样品与检测探针混合通过竞争结合将标记有生物素的DNA序列游离出来；然后加入捕获探针偶联的磁性微球；再向磁性微球中加入偶联有酶分子的试剂；通过微流控技术分散磁性微球，并加入荧光底物；最后通过荧光计数得到待测样本中T‑2毒素的含量。该检测方法利用酶促反应产生的荧光信号结合微流控技术实现了对T‑2毒素的单分子水平的超灵敏检测，且具有样本用量小、准确性好等优点，在谷物样品中检测低浓度T‑2毒素具有巨大的应用潜力。

主权项：1.一种谷物中T-2毒素单分子水平定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、样品前处理及检测试剂的制备取谷物样品，粉碎后分散到甲醇溶液中，室温搅拌后，用0.22μm的滤膜过滤得到上清液，滤液用缓冲液稀释后制备成待测液；制备真菌毒素检测探针A1-BLP以及捕获探针偶联磁性微球MB-CP；所述的真菌毒素检测探针A1-BLP包含T-2毒素核酸适配体A1及生物素标记的BLP序列，其中生物素标记的BLP序列按照碱基互补配对原则与T-2毒素核酸适配体A1中的一段结合形成双链结构；所述的捕获探针偶联磁性微球MB-CP包含表面羧基活化的磁性微球MB和捕获探针DNA序列CP，其中捕获探针DNA序列修饰在磁性微球MB表面；S2、将S1中待测液样本加入到含有S1中制备的A1-BLP的溶液中混合反应，使待测样本中的T-2毒素与其核酸适配体A1进行充分结合，同时游离出生物素标记的BLP序列；S3、向S2所得混合溶液中加入S1中制备的MB-CP，游离的生物素标记的BLP序列与捕获探针DNA序列CP通过碱基互补配对形成MB-CP-BLP，反应完成后，对溶液进行磁分离处理得到MB-CP-BLP；S4、向S3中得到的MB-CP-BLP加入链霉亲和素偶联的β-半乳糖苷酶SBG，充分反应后通过磁分离处理得到MB-CP-BLP-SBG；S5、利用微流控技术将S4中得到的MB-CP-BLP-SBG分散到微孔阵列中，每个微孔中能且只能容纳一个磁性微球；S6、向S5中的每个微孔中加入荧光底物，经过酶催化底物的充分反应，得到荧光分子产物；S7、利用荧光显微成像对S6中的荧光微孔进行计数，通过荧光微孔的数量对照标准曲线，得到所测试样品中T-2毒素分子的含量。

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