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申请/专利权人：湖北万德瑞生命科学技术有限公司
摘要：本发明提出了一种假单胞菌中色氨酸侧链氧化酶的制备方法，包括如下步骤：S1，假单胞菌ATCC29574经裂解，超声破碎和离心后得到粗酶液；S2，将色氨酸溶于N,N‑二甲基甲酰胺中，然后加入二环己基碳二亚胺和三乙胺反应，得到淡黄色油状的反应产物；S3，将氨基琼脂糖用N,N‑二甲基甲酰胺进行平衡，然后将步骤S2的反应产物加入平衡好的氨基琼脂糖中，震荡反应得到色氨酸偶联的氨基琼脂糖；S4，粗酶液通过色氨酸偶联的氨基琼脂糖作为填料的亲和层析柱进行亲和层析，得到纯化的色氨酸侧链氧化酶。本发明加入脱水剂二环己基碳二亚胺后发生亲核攻击，生成O‑酰基异脲；加入三乙胺碱性催化剂，三乙胺中氮原子通过氢键与底物中的氧、氮等原子相互作用，提高反应物的亲核性，进而提高色氨酸的偶联量。
主权项：1.一种假单胞菌中色氨酸侧链氧化酶的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：S1，假单胞菌ATCC29574经裂解，超声破碎和离心后得到粗酶液；S2，将色氨酸溶于N,N-二甲基甲酰胺中，然后加入二环己基碳二亚胺和三乙胺搅拌反应，得到淡黄色油状的反应产物；S3，将氨基琼脂糖用N,N-二甲基甲酰胺进行平衡，然后将步骤S2的反应产物加入平衡好的氨基琼脂糖中，震荡反应得到色氨酸偶联的氨基琼脂糖；S4，粗酶液通过色氨酸偶联的氨基琼脂糖作为填料的亲和层析柱进行亲和层析，得到纯化的色氨酸侧链氧化酶。
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百度查询： 湖北万德瑞生命科学技术有限公司 一种假单胞菌中色氨酸侧链氧化酶的制备方法
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