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申请/专利权人：石家庄博瑞迪生物技术有限公司
摘要：本发明公开了一种基于多重TaqMan的qPCR特异性检测方法，属于生物技术领域，包括如下步骤：根据布鲁氏菌的特异基因序列设计qPCR特异性引物组，确保试剂盒对羊、牛以及猪的布鲁氏菌的特异性检测；根据设计得到的qPCR特异性引物组检测羊、牛以及猪的布鲁氏菌的TaqMan荧光定量qPCR特异性引物组，并以待测样本DNA为模板进行荧光定量qPCR扩增检测；根据扩增曲线情况判断待检样品中是否含有布鲁氏菌，如果扩增曲线无典型荧光扩增曲线，则待检样品中不含有布鲁氏菌。本发明的检测方法，通过对引物和探针的独特设计，优化了qPCR反应体系，实现了实时监测技术应用。
主权项：1.一种基于多重TaqMan的qPCR特异性引物组，其特征在于，该qPCR特异性引物组的检测方法，包括以下步骤：S1、根据布鲁氏菌的特异基因序列设计qPCR特异性引物组，确保试剂盒对羊、牛以及猪的布鲁氏菌的特异性检测；所述qPCR特异性引物组包括正向引物、反向引物和TaqMan荧光探针序列；S2、根据设计得到的qPCR特异性引物组检测羊、牛以及猪的布鲁氏菌的TaqMan荧光定量qPCR特异性引物组，并以待测样本DNA为模板进行荧光定量qPCR扩增检测；S3、根据扩增曲线情况判断待检样品中是否含有布鲁氏菌，如果扩增曲线无典型荧光扩增曲线，则待检样品中不含有布鲁氏菌；S4、验证步骤，通过构建含有目标基因片段的质粒，使用包含目标基因片段的质粒DNA，作为阳性对照样，用于验证试检测方法的有效性；所述特异基因序列设计qPCR特异性引物组如下表所示： 验证步骤中所述的目标基因片段的质粒DNA如下表所示：
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权利要求：
百度查询： 石家庄博瑞迪生物技术有限公司 一种基于多重TaqMan的qPCR特异性检测方法、试剂盒及其应用
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