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申请/专利权人：南通大学
摘要：本发明提供一种发根农杆菌介导的柳树毛状根遗传转化方法，包括：受体材料准备；载体构建；菌液制备；发根农杆菌侵染和受体材料培养。本发明绕开了由外植体脱分化形成愈伤组织再分化形成体胚的漫长步骤，使遗传转化周期大大缩短，在非无菌环境下可实现基因高效转化。
主权项：1.一种发根农杆菌介导的柳树毛状根遗传转化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、受体材料准备：剪取长度为10cm的粗细均匀的柳树嫩茎于土壤基质内扦插培养待用；S2、载体构建：利用转化法，将35S-GFP载体转入发根农杆菌感受态细胞中；S3、菌液制备：取菌液在含有相应抗生素的固体TY培养基上划线，并于28℃恒温培养箱内培养2d；挑取单菌落于800μL含有相应抗生素的液体TY培养基中，并于28℃、200rpm摇床活化24h；吸取活化后的1μL菌液于100mL含有相应抗生素和200μM乙酰丁香酮的液体TY培养基中，并于28℃、200rpm摇床上震荡培养2～3天，当测定菌液浓度OD600＝0.80时停止培养，并加入表面活性剂暗处静置1h，得到发根农杆菌菌液；S4、发根农杆菌侵染和受体材料培养：选取步骤1中生长良好的柳树扦插苗，在流水清洗后切除柳树扦插苗的根部，将剩下的茎段去除多余叶片后放入菌液中浸泡20min，浸泡结束后立即将茎段插入潮湿的蛭石中，并从顶端往下注入3ml菌液进行培养，两周后即可获得转基因转化苗。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南通大学 一种发根农杆菌介导的柳树毛状根遗传转化方法
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