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一种假俭草染色体特异荧光原位杂交探针的制备方法及其应用 

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申请/专利权人:江苏省中国科学院植物研究所

摘要:本发明提供了一种假俭草染色体特异荧光原位杂交探针的制备方法及其应用,涉及分子生物学检测技术领域。本发明利用已经公布的假俭草基因组序列进行非重复DNA区域的寡核苷酸序列发掘,以获得的染色体特异单拷贝非重叠寡核苷酸序列为基础构建探针文库,采用乳化聚合酶链式反应方法扩增探针文库,扩增产物再经体外转录和反转录获得单链DNA探针,最后通过荧光标记DNA探针成为荧光原位杂交探针。本发明提供的寡核苷酸荧光探针及荧光原位杂交体系可用于假俭草及近缘物种染色体的鉴定与核型分析、染色体DNA重排、染色体配对和亲缘关系分析等分子细胞遗传学问题,也为假俭草远缘杂交和辐射诱变育种的细胞学鉴定提供重要的技术支持。

主权项:1.一种假俭草染色体特异荧光原位杂交探针的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:构建探针文库:选取假俭草基因组中非重复DNA目标区域,连续设计与目标区域完全互补的单链寡核苷酸序列作为候选探针,在候选探针的两端分别加上聚合酶链式反应扩增引物序列,通过基因芯片合成得到目的探针文库;扩增目的探针文库:对加有扩增引物的目的探针文库进行PCR扩增;制备文库RNA:对扩增产物进行体外转录获得目的探针文库对应的文库RNA;制备DNA探针:对所述文库RNA进行反转录获得单链DNA探针;制备荧光探针:对获得的单链DNA探针进行荧光标记,即得荧光原位杂交探针。

全文数据:

权利要求:

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