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申请/专利权人：南京医科大学;苏州南医大创新中心
摘要：本发明涉及一种制备皮质‑下皮质多脑区复合类器官的诱导分化方法，属于生物医学技术领域。本发明将H9细胞贴壁增殖培养并消化得到拟胚体，一部分细胞分化形成神经管样细胞结构，用神经诱导培养液悬浮培养，使其自发形成球状神经前体细胞，将神经球包埋到基质胶内，用神经诱导培养液继续培养，获得皮质神经球；另一部分细胞在SHH通路激动剂的作用下进行腹侧化持续诱导，获得下皮质视神经球。将皮质神经球和下皮质神经球同时消化成为单细胞，静置待其聚集并自发组织构成皮质‑下皮质多脑区复合类器官。
主权项：1.一种制备皮质-下皮质多脑区复合类器官的诱导分化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1、将H9细胞制成拟胚体，将所述拟胚体在神经诱导培养液中悬浮分化，记为第0天，所述神经诱导培养液包括DMEMF12培养基、非必须氨基酸NEAA和细胞培养添加剂N2；步骤S2、分化第7-8天，贴壁培养，得到神经管样细胞结构；步骤S3、分化第10-12天，取一部分神经管样细胞吹下，沉降弃上清，用神经诱导培养液悬浮培养底部细胞，得到球状神经前体细胞，将球状神经前体细胞包埋到基质胶内，使用添加神经生长因子B27的神经诱导培养液培养，得到皮质神经球；另取一部分神经管样细胞，在添加SHH通路激动剂的神经诱导培养液中悬浮培养，得到下皮质神经球；步骤S4、分化第25-27天，将皮质神经球和下皮质神经球同时消化成为单细胞，在添加神经生长因子B27、碱性成纤维细胞生长因子BFGF和ROCK抑制剂的神经诱导培养液中培养，所述单细胞自发聚集，记为融合第0天，至融合第10-15天时自发形成所述皮质-下皮质多脑区复合类器官。
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权利要求：
百度查询： 南京医科大学 苏州南医大创新中心 一种制备皮质-下皮质多脑区复合类器官的诱导分化方法
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