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申请/专利权人：桂林莱茵生物科技股份有限公司

摘要：本发明提供了一种蔗糖合成酶及其在食品中的应用，蔗糖合成酶的制备方法包括以下步骤：1菌株活化：将甲基杆菌接种到牛肉膏蛋白胨培养基中，培养，得到种子液；甲基杆菌保藏编号为SHBCCD10457，上海保藏微生物中心；2发酵：将种子液接种到发酵培养基，在发酵罐中进行发酵培养，得到发酵液；3纯化；4将洗脱液中的蔗糖合成酶进行超滤置换，置换于20mMpH为4.6的磷酸氢二钠‑磷酸二氢钠缓冲液中，得到蔗糖合成酶液，蔗糖合成酶液中酶活为500UμL，将蔗糖合成酶液和保护液等体积混合。本发明的蔗糖合成酶的酶活高、稳定性强，便于储存、长途运输和推广使用。

主权项：1.一种蔗糖合成酶，其特征在于，蔗糖合成酶的制备方法包括以下步骤：1菌株活化：将甲基杆菌按照牛肉膏蛋白胨培养基体积百分比2-4％的接种量接种到牛肉膏蛋白胨培养基中，40-45℃，160-180rmin培养50-60h，得到种子液；甲基杆菌保藏编号为SHBCCD10457；2发酵：将种子液按照发酵培养基体积百分比2-4％的接种量接种到发酵培养基，发酵培养基包括以下组分：纤维二糖3-5gL、玉米浆7-9gL、蛋白胨6-8gL、黄豆粉2-4gL、葡萄糖8-11gL、甘油14-16gL、谷氨酸钠4-6gL、柠檬酸三钾盐3-5gL、磷酸二氢钾1-2gL、碳酸氢钠2-4gL、氯化铵1-3gL、尿素4-6gL、酵母抽提物1-2gL、二水氯化钙0.6-0.9gL、硫酸镁1.3-1.7gL、氨基己二酸0.006-0.009gL和甜菜碱0.005-0.008gL；在发酵罐中进行发酵培养，发酵温度为40-45℃、罐压0.02-0.03MPa、通气量1:1vvmin、搅拌速度350-400转分钟，发酵时间50-60h，得到发酵液；3纯化：将发酵液进行固液分离，去除菌体，将滤液55～60℃减压浓缩至滤液体积的20-25％，得到浓缩液；向浓缩液中加入35wt％硫酸铵水溶液静置4-5h，去沉淀，再加入65wt％硫酸铵水溶液，静置7-8h，去上清，得到蔗糖合成酶粗品，使用凝胶层析柱进行纯化，得到洗脱液；4将洗脱液中的蔗糖合成酶进行超滤置换，置换于20mMpH为4.6的磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液中，得到蔗糖合成酶液，蔗糖合成酶液中酶活为500UμL，将蔗糖合成酶液和保护液混合，得到蔗糖合成酶。

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