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申请/专利权人：大连三仪动物药品有限公司;江苏三仪生物工程有限公司

摘要：本发明属于应用微生物技术领域，尤其涉及用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物、制备方法及在饲料中的应用，其中以水作为杜仲叶的发酵媒介，一方面杜仲叶中易溶于水的活性物质一部分在高压灭菌过程中提取出来，在复合益生菌发酵过程中提高活性成分的溶解率；另一方面葡萄牙棒孢酵母等益生菌代谢产生的醇类，将杜仲叶中的黄酮类化合物、多酚和绿原酸等活性物质进一步提取，增加了杜仲叶有效成分的提取效率。同时益生菌以杜仲叶为底物增加了胞内外代谢产物的产量。二者相互作用，通过减少禽类体内尿酸的生成、增加体内尿酸的排出、抑制炎症反应和致病菌感染、提高应激能力和肠道菌群丰度、增强宿主动物机体免疫力等作用实现对水禽痛风的防治。

主权项：1.用于防治水禽痛风的杜仲叶提取物的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：S1：干燥的杜仲叶超微粉，按照料液比1:16加入纯化水及杜仲叶发酵培养基，高压灭菌，冷却，无菌接种复合发酵种子液进行发酵培养，得到杜仲叶发酵液；所述杜仲叶发酵培养基为：蔗糖80～150gL、胰蛋白胨10～50gL、酵母粉25～50gL、磷酸氢二钾1～5gL、乙酸钠1～5gL、硫酸镁0.05～0.5gL、L-半胱氨酸0.1～1gL、硫酸锰0.005～0.05gL、碳酸钙0.05～1gL；pH5.5～7.2；所述杜仲叶发酵培养基的添加方式为：首先，在高压灭菌前加入除蔗糖以外的杜仲叶发酵培养基其他组分；其次，所述蔗糖分三次加入发酵体系中，分别为接种前、发酵8～10h和发酵14～16h；所述高压灭菌为105～120℃高压灭菌20～30min；所述冷却至35～45℃；所述发酵培养为35～42℃下培养24～36h，罐压0.1MPa，在发酵过程中用盐酸或氢氧化钠维持pH值5.0~7.0；所述无菌接种为按照3～5%接种量接种；所述复合发酵种子液是由罗伊氏乳杆菌CCTCCM20221519、葡萄牙棒孢酵母CCTCCM20221520和贝莱斯芽孢杆菌CCTCCM2021287的种子培养液按照体积比2-4:0.75-1.5:1-2混合得到，各菌种的种子有效活菌数分别为5~10×108cfumL；所述发酵培养过程包括两个阶段：a、有氧培养：起始16小时内，维持空气通气量60～180m3h，间隔通气，搅拌转速100~150rmin，温度35～42℃；b、厌氧培养：发酵进行16h后进行厌氧培养，保持发酵液上层微溶氧状态，静止培养至24～36h，间隔搅拌，温度35～42℃，得到杜仲叶发酵液；S2：将S1得到的杜仲叶发酵液离心分离，分别收集上清液和沉淀物；S3：向S2收集的沉淀物中加入纯化水，再依次加入溶菌酶和中性蛋白酶处理，所得料液再经匀浆、离心，收集上清液即为胞内粗酶液；S4：将S2收集的上清液和S3收集的胞内粗酶液混合，即得到防治水禽痛风的杜仲叶提取物。

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