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申请/专利权人：华侨大学
摘要：本发明公开了一种适配体或核糖开关与配体结合亲密度和特异性的检测方法，通过共享一个由几个碱基对组成的桥，将一个锤头核酶整合到候选适配体或核糖开关中。当配体与结构化RNA的结合时，导致构象改变，从而改变整合了的锤头核酶的构象变化，导致锤头核酶剪切效率的变化。据此，不仅可以体外测量配体结合的特异性和结合亲和力KD，也可以分析核酶的裂解动力学Kobs。本发明灵敏度高，只要nM水平的RNA就能检测和观察到核酶的剪切，同时KD的检测水平在uM范围，而且不需要放射性元素和贵重的仪器，在普通的实验装备条件下就能开展。
主权项：1.一种适配体或核糖开关与配体结合亲密度和特异性的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：1设计变构核酶：将一个锤头核酶整合到候选的适配体或核糖开关中，通过共享一个或几个碱基对组成桥；该桥是候选的适配体或核糖开关和锤头核酶之间的连接，其将配体结合信息从适配体或核糖开关传递给锤头核酶；配体与结构RNA的结合导致构象核酶，如果这种变化有利于锤头核酶以适当的方式折叠，则会诱导裂解；然而，如果是相反的方式，那么该裂解就会被抑制；2通过PCR扩增，获得上述变构核酶的全长DNA的扩增产物；3将步骤2所得的扩增产物转录成RNA；4将步骤3所得的RNA进行裂解后，在Mg离子存在的条件下与特定的配体进行孵育反应，再与装载缓冲液混合，接着依次经PAGE凝胶分离和SYBR金染色观察，同时进行测量结合亲和力KD，分析核酶的裂解动力学Kobs。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 华侨大学 一种适配体或核糖开关与配体结合亲密度和特异性的检测方法
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