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申请/专利权人：海南大学
摘要：本发明公开了一种通用型‘枷锁’CRISPRCas单碱基核酸检测系统并对microRNA进行单碱基检测的方法及应用。该方法针对靶标突变链（与靶标miRNA有1个碱基不同）也能激活Cas13acrRNA复合体反式剪切活性并造成检测假阳性以及当前单碱基检测方法检测位点局限性的问题，引入肽核酸（PNA），利用PNA与核酸具有较强的亲和力的特性，通过Watson‑Crick碱基互补配对原则，将突变链进行“封闭”，实现只有靶标miRNA才能激活Cas13acrRNA复合体反式剪切活性，通过剪切带有荧光基团和猝灭剂的RNA链，释放荧光信号，最终实现单碱基检测的特异性需求，达到去除或者降低非特异性信号（假阳性）的目的；同时，并实现在miRNA序列上几乎所有单碱基检测位点都可检测区分。
主权项：1.一种用于检测miRNA单核苷酸突变的通用型CRISPR系统，其特征在于：PNA是一种对核酸有高亲和力的类核酸物质；Cas13a核酸酶可以在人工编程的crRNA指引下切割与crRNA互补的靶RNA，之后激活其反式切割活性，切割单链DNA荧光报告分子产生荧光值；在Cas13a检测RNA前，在反应目标物中添加与靶RNA突变链的链互补PNA进行杂交，使其与可能存在的单碱基突变链进行互补结合，从而阻止单碱基突变链产生的假阳性。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 海南大学 一种用于microRNA单碱基检测的通用型CRISPR/Cas系统
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