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申请/专利权人：广东省农业科学院动物科学研究所
摘要：本发明公开了一种利用鸡全基因组CRISPR高通量技术筛选呕吐毒素抗性基因的方法。属于动物育种技术领域。本发明先获得了稳定表达Cas9蛋白的DF‑1细胞系。随后构建鸡全基因组sgRNA文库质粒并将其包装成慢病毒感染DF‑1‑Cas9细胞系，利用流式细胞术获得敲除细胞库。以呕吐毒素为模型攻毒敲除细胞库，收集存活细胞并扩大培养，提取细胞基因组信息进行高通量测序，再使用MAGeCK软件进行差异分析，最后构建单基因敲除细胞系验证抗性基因。本发明构建了鸡全基因组敲除文库筛选技术，成功筛选到呕吐毒素抗性基因，对禽细胞建立全基因组CRISPR敲除细胞库的流程提供参考意义，为鸡功能基因的高通量筛选奠定基础。
主权项：1.一种利用鸡全基因组CRISPR高通量技术筛选呕吐毒素抗性基因的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）构建鸡全基因组sgRNA文库；（2）将鸡全基因组sgRNA文库进行慢病毒包装，感染稳定表达Cas9蛋白的宿主细胞，并筛选以获得稳定表达鸡全基因组sgRNA文库的敲除细胞库；（3）使用呕吐毒素为攻毒模型攻毒敲除细胞库，收集存活细胞并扩大培养；（4）提取细胞基因组信息进行高通量测序，使用MAGeCK软件进行差异分析，得到候选基因；（5）构建单基因敲除细胞系验证。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广东省农业科学院动物科学研究所 一种利用鸡全基因组CRISPR高通量技术筛选呕吐毒素抗性基因的方法
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