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申请/专利权人：西南民族大学

摘要：本发明公开了一种青稞多糖HB‑1以及硫酸化多糖HB‑S的制备方法。利用本发明所述制备方法制得的青稞多糖HB‑1组分不含蛋白或核酸等杂质，纯度高且均一，能够满足多糖结构鉴定和生物活性评价的需求；同时利用本发明所述青稞硫酸化多糖HB‑S制备方法制得的青稞硫酸化多糖HB‑S与HB‑1均具有较强的抗氧化能力且HB‑S的抗氧化活性更强。另外，HB‑S与HB‑1均对ɑ‑葡萄糖苷酶和ɑ‑淀粉酶具有抑制作用，且HB‑S对ɑ‑葡萄糖苷酶和ɑ‑淀粉酶的抑制作用更强，再者，HB‑1与HB‑S对ɑ‑葡萄糖苷酶和ɑ‑淀粉酶均有明显的荧光猝灭作用，证明HB‑1和HB‑S与二者相互结合，且相对于HB‑1，HB‑S与ɑ‑葡萄糖苷酶和ɑ‑淀粉酶结合位点更多。适合在生物技术领域推广运用。

主权项：1.一种青稞多糖HB-1制备方法，其特征在于包括以下步骤：A、将青稞粉碎得到青稞粉末，置于干燥器内备用；B、将青稞粉末置于烧瓶内，并加入石油醚，所述青稞粉与余石油醚的料液比为1:10gmL，在75℃温度下回流脱脂2h，适当冷却后倒出，减压抽滤后收集沉淀，在60℃干燥箱中烘干，得到脱脂青稞粉末；C、将脱脂青稞粉末置于烧杯中，并加入蒸馏水，所述脱脂青稞粉末与蒸馏水的料液比1:25gmL，接着用0.1molL的HCl溶液调节pH至6.4，加入0.2％mm高温α-淀粉酶在90℃下搅拌30min，提取3h，使用0.1molL碘液作为指示剂，滴加进样品溶液中，观察溶液是否变蓝，直至碘液不变色后，停止热水浸提，使其冷却到室温，先用多层纱布过滤沉淀，滤液静置1h后减压抽滤并收集抽提液，滤渣用上述方法重复提取一次，合并两次抽提液，将抽提液旋转蒸发浓缩至12体积，冷却至室温后在离心转速为8000rmin的条件下离心5min，弃去沉淀，收集合并上清液；D、将上清液与Sevage试剂按照体积比4:1加入三角瓶中混合均匀，摇床震荡1h，使两者充分反应，随后在分液漏斗中静置，待其分层后，弃去有机层和中间层，收集青稞多糖所在水相层；再向水相层中加入14水相体积的Sevage试剂，重复上述操作提取2次，直到震荡后中间层没有明显白色泡沫为止，将水相层收集合并，并使用旋转蒸发仪进行浓缩得到浓缩提取液；E、向浓缩提取液中缓慢加入4倍体积无水乙醇，上下颠倒充分震荡混匀，4℃下静置过夜，然后在离心转速为8000rmin的条件下离心10min后并收集沉淀；F、将沉淀用无水乙醇，石油醚冲洗，除去多余水分和杂质，鼓风干燥待有机溶剂挥发后，用蒸馏水复溶得到多糖溶液；G、将多糖溶液分装在透析袋内，置于烧杯中，流水透析72h，收集截留在透析袋中的样品；H、将透析后的样品浓缩后冷冻干燥，得到青稞粗多糖HB；I、在烧杯中放入适量DEAE-52纤维素填料并加入蒸馏水溶胀48h，待DEAE-52纤维素沉到烧杯底部且填料页面不再升高时，将浸泡后的纤维素减压抽滤，抽干水分后，加入0.5MNaOH溶液，不断搅拌，浸泡2h后，抽滤掉NaOH，用大量蒸馏水冲洗至填料pH为中性，再加入0.5MHCl溶液，不断搅拌，浸泡2h，抽滤掉HCl溶液，再用大量蒸馏水冲洗至中性，将预处理好的DEAE-52纤维素置于20％酒精中在4℃保存；J、将层析柱冲洗烘干，固定在铁架台上，保持层析柱与桌面垂直，层析柱下端安装并拧紧，将与处理后DEAE-52纤维素搅拌均匀，沿玻璃棒缓慢加入层析柱中，待液面下降到离DEAE-52纤维素液面3cm处，继续加入DEAE-52纤维素，轻轻拨动液面，直到将所有纤维素全部加入层析柱中，接着将层析柱上端连接恒流泵，调整流速，泵入蒸馏水，使柱内酒精全部泵出，待纤维素液面不再降低，完成层析柱的装填；K、将青稞粗多糖HB溶于蒸馏水中，所述青稞粗多糖HB与蒸馏水的料液比10:1mgmL，接着在离心转速为8000rmin的条件下离心5min去除沉淀后使用0.45μm水系滤膜过滤得到HB溶液，然后沿着层析柱环形缓慢滴加HB溶液；开启恒流泵，使用蒸馏水进行洗脱，调节流速为6mLmin，收集洗脱液并减压浓缩；采用透析袋对浓缩液透析48h，所述透析袋截留分子量为3500Da；冷冻干燥后得到青稞多糖HB-1。

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