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申请/专利权人：南京医科大学;苏州南医大创新中心
摘要：本发明涉及一种制备基底前脑胆碱能类器官的诱导分化方法，属于生物医学技术领域。本发明将胚胎干细胞H9增殖至60‑80％密度后将其消化制成拟胚体，在神经诱导培养液中悬浮培养分化，在培养液中添加Wnt通路抑制剂XAV939和腹侧化因子Purmorphamine进行半换液培养。分化第10天起在培养液中加入神经生长因子NGF，得到神经管样细胞结构。将形成的神经管样细胞结构吹下并悬浮培养，使其自发形成球状神经前体细胞，培养液中加入神经生长因子B27，并将球状神经前体细胞分散为小球，在分化第60天获得包含大量胆碱能神经元的基底前脑胆碱能类器官。本发明优化了基底前脑胆碱能类器官的诱导方法，能够低成本稳定制备胆碱能神经元，为多种医学实验提供了细胞模型。
主权项：1.一种制备基底前脑胆碱能类器官的诱导分化方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1、将H9细胞贴壁增殖培养，消化制成拟胚体，在神经诱导培养液中悬浮分化，记为第0天，所述神经诱导培养液包括DMEMF12培养基、非必须氨基酸NEAA和细胞营养添加剂N2；步骤S2、分化第1-10天，每天使用添加Wnt通路抑制剂和腹侧化因子的神经诱导培养液进行半换液培养；步骤S3、分化第10-12天，使用添加腹侧化因子和神经生长因子NGF的神经诱导培养液进行培养，得到神经管样细胞结构；步骤S4、分化第16-18天，将神经管样细胞结构吹下，自然沉降，将管底细胞悬浮培养，得到球状神经前体细胞，所述悬浮培养使用添加腹侧化因子、神经生长因子NGF和B27的神经诱导培养液；步骤S5、分化第22-24天，将所述球状神经前体细胞分散为小球，使用添加腹侧化因子、神经生长因子NGF和B27的神经诱导培养液培养；步骤S6、分化第26-28天，使用添加神经生长因子NGF和B27的神经诱导培养液，持续培养至60-65天，得到所述基底前脑胆碱能类器官。
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权利要求：
百度查询： 南京医科大学 苏州南医大创新中心 一种制备基底前脑胆碱能类器官的诱导分化方法
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