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申请/专利权人：福建农林大学

摘要：本发明涉及一种利用SNP标记KZ288479.1_95621鉴别蜂群抗囊状幼虫病性状的方法，包括中华蜜蜂幼虫个体取样、蜜蜂幼虫样本DNA提取、合成引物、PCR检测和鉴别中华蜜蜂抗囊状幼虫病性状，根据从该蜂群中随机收集的工蜂幼虫个体在SNP标记KZ288479.1_95621出现C基因的频率PC和T基因的频率PT之间是否存在显著差异，鉴别中华蜜蜂抗囊状幼虫病性状。本发明从分子水平，提供了使用中华蜜蜂工蜂幼虫抗囊状幼虫病相关的SNP（KZ288479.1_95621）标记，科学、准确、快速地鉴别中华蜜蜂蜂群抗囊状幼虫病性能，可以大大缩短抗囊状幼虫病中华蜜蜂的选育周期，加快蜜蜂育种速度。

主权项：1.一种利用SNP标记KZ288479.1_95621鉴别蜂群抗囊状幼虫病性状的方法，其特征在于：鉴别步骤如下：（1）蜜蜂幼虫取样：从被检测的中华蜜蜂蜂群中，收集工蜂幼虫个体，随机取样，每群以100只幼虫代表整个蜂群，将蜜蜂样本置于-80℃冰箱中冷冻备用；（2）蜜蜂幼虫DNA的提取：分别将步骤（1）中冷冻的幼虫，进行组织破碎，提取基因组DNA，并进行DNA浓度和纯度测定；（3）合成引物：引物对Primer-F和Primer-R的序列如下：Primer-F：5’-CCTTGTTCCTTTCTACCGTCA-3’；Primer-R：5’-AAACATGCATTTGCACGAAG-3’；（4）PCR检测：以步骤（2）幼虫DNA为模版，以Primer-F和Primer-R为引物进行PCR；反应的体系为：总体积25μL，内含反应混合物Mix12.5μL，Primer-F0.4μL，Primer-R0.4μL，DNA模版2μL，ddH2O9.7μL；反应的条件为：94℃预变性；94℃变性15s，57℃退火30s，72℃延伸1min，共35个循环；72℃延伸5min；对PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，将出现目的条带的PCR反应液进行测序；（5）鉴别蜂群抗囊状幼虫病性状：将步骤（4）的测序结果用Alignment软件进行序列比对分析，计算被检测蜂群KZ288479.1_95621位点的基因频率，根据蜂群的C等位基因频率PC值，鉴别蜂群抗囊状幼虫病能力强弱；当蜂群的C等位基因频率PC显著大于T等位基因频率PT时，此蜂群为抗囊状幼虫病蜂群，所述显著指统计学的P0.05。

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