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申请/专利权人:北京市食品安全监控和风险评估中心(北京市食品检验所)
摘要:本发明涉及检测技术领域,具体公开了一种检测乳粉中双歧杆菌的微滴数字PCR方法及应用。本发明的检测乳粉中双歧杆菌的微滴数字PCR方法,包括待测品的前处理步骤,所述前处理步骤包括:1对所述待测品的溶液进行离心,去上清;2进行冷热交替处理;3以蛋白酶K进行消化;4以溶菌酶进行消化;5以蛋白酶K和缓冲液GA进行消化。本发明的检测方法,速度快、特异性好、准确度高,适用于乳粉产品的双歧杆菌的定量检测工作。
主权项:1.一种检测乳粉中双歧杆菌的微滴数字PCR方法,其特征在于,包括待测品的前处理步骤,所述前处理步骤包括:1对所述待测品的溶液进行离心,去上清;具体包括两次离心,第一次离心为:以11,000~12,000rpm,离心10~12min;第二次离心为:将所述第一次离心获得的沉淀与PBS混合,以11,000~12,000rpm,离心10~12min;2进行冷热交替处理;具体为:-18℃~-20℃,处理1.5~2min后,100℃处理0.9~1.1min,反复多次;3以蛋白酶K进行消化;所述蛋白酶K与所述待测品的质量比为0.015~0.30:1;4以溶菌酶进行消化;5以蛋白酶K和缓冲液GA进行消化;消化的条件为55~57℃,1.2~1.5h;所述蛋白酶K与所述缓冲液GA的质量比为1:0.1~0.2;所述微滴数字PCR方法所用的引物、探针如SEQIDNo.1-3所示。
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