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申请/专利权人:中国科学院华南植物园
摘要:本发明公开了一种以叶片为外植体获得桃金娘转基因愈伤的方法。以桃金娘叶片为外植体,将已消毒的桃金娘叶片置于预培养培养基预培养后,取出叶片进行农杆菌侵染,再接种到共培养培养基进行共培养,再转移到愈伤组织诱导培养基进行选择培养,进行转基因愈伤的鉴定获得抗性愈伤。以桃金娘叶片作为外植体,材料获取便利,侵染的方法操作便利快捷,该方法从外植体获得的转基因愈伤的转基因效率高,最高可达到84.63%的转化效率。该方法可以应用于木本植物基因功能验证以及新型育种,填补了桃金娘功能验证体系的缺失。本发明方法的操作简单、易于掌握,有利于开展桃金娘分子生物学的研究等后续工作。
主权项:1.一种以叶片为外植体获得桃金娘转基因愈伤的方法,其特征在于,包括如下步骤:以桃金娘叶片为外植体,将已消毒的桃金娘叶片置于预培养培养基MS+0.005~0.01mgLTDZ+10~20gL蔗糖+6~8gL琼脂pH5.6~5.8预培养后,取出叶片进行农杆菌侵染,再接种到共培养培养基MS+0.005~0.01mgLTDZ+200~205mgLAS+10~20gL蔗糖+6~8gL琼脂pH5.6~5.8进行共培养,再转移到愈伤组织诱导培养基MS+0.5~1mgL6-BA+0.05~0.1mgLNAA+0.005~0.01mgLTDZ+200~205mgLCef+5~10mgLHyg+20~30gL蔗糖+6~8gL琼脂pH5.6~5.8进行选择培养,进行转基因愈伤的鉴定获得抗性愈伤。
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权利要求:
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