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申请/专利权人：广州达博生物制品有限公司

摘要：本发明公开了一种全能核酸酶及其制备方法，涉及生物技术领域。本发明提供的全能核酸酶的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示。本发明还提供了编码全能核酸酶的核酸序列，如SEQIDNO:2所示。本发明还提供了全能核酸酶的制备方法，包括1构建重组表达质粒；2转化酵母菌株，筛选阳性转化子；3酵母重组表达菌株发酵；4分离纯化发酵液中的全能核酸酶。本发明通过优化核酸酶基因序列和全能核酸酶的制备方法，获得了高纯度、活性强的全能核酸酶，能够满足疫苗等生物制品行业的需求。

主权项：1.一种全能核酸酶的制备方法，其特征在于，所述的全能核酸酶的氨基酸序列如SEQIDNO:3所示，所述的制备方法包括以下步骤：（1）构建重组表达质粒；（2）转化酵母菌株，筛选阳性转化子；（3）酵母重组表达菌株发酵；（4）分离纯化发酵液中的全能核酸酶；步骤（1）中所述的重组表达质粒的构建方法包括以下步骤：1）以SEQIDNO:2所示的序列为模板进行PCR扩增，获得目的片段；2）将目的条带用EcoRI和SalI双酶切，把酶切产物与载体相连接；3）把连接产物全部转入到大肠杆菌中，获得重组表达质粒；步骤（4）中分离纯化发酵液中的全能核酸酶包括以下步骤：1）溶解菌体：在菌体沉淀中加溶菌缓冲液，混匀，过滤；2）高压破菌：将过滤后的菌液倒入破碎仪，将泵头内压力提升至1100-1300bar，停止加压，接收破碎后的菌液，将破碎菌液离心，取上清液；3）离子交换层析：平衡QFF层析柱，层析系统的A1管道放入样品瓶，软件设置AotuUVzero，设置InjecttionMack，开始进样，温度为2-8℃；当UV280的数值大于100mAU后，用干净容器收集进样流穿，进样结束后，将A1管道放入阴离子交换缓冲液A瓶中，继续运行层析系统，当UV280的数值降低至500mAU后，停止收集流穿；4）亲和层析：平衡层析NI柱，层析系统中的A1管道放入样品瓶，软件设置AotuUVzero，设置InjecttionMack，开始进样，温度2-8℃，进样结束后，A1管道放入亲和缓冲液A瓶中，运行2倍柱体积，设置梯度20%，运行3倍柱体积，设置梯度60%，运行后，观察UV280的数值，收集洗脱峰；5）透析：将亲和层析洗脱样品加入透析袋，搅拌透析4-6小时，进行过滤，收集核酸酶原液。

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