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申请/专利权人：安徽医科大学第一附属医院

摘要：本发明公开了一种囊胚细胞解离成单个细胞的方法，涉及遗传学检测技术领域，具体为一种囊胚细胞解离成单个细胞的方法，包括来源于植入前遗传学检测中患者捐赠的异常囊胚或嵌合体囊胚作为实验材料囊胚；囊胚细胞解离成单个细胞的具体步骤如下：步骤一：囊胚复苏；步骤二：AccutaseSolution液准备；步骤三：操作皿准备；步骤四：囊胚去透明带；步骤五：细胞解离；步骤六：细胞分散；步骤七：单细胞收集。该囊胚细胞解离成单个细胞的方法，操作简洁且细胞损伤小；仅使用了一种刺激性小、较温和的酶AccutaseSolution；分散细胞效率高；在细胞分散时，利用固定针的压力来分散细胞，大大提高分散细胞的效率。

主权项：1.一种囊胚细胞解离成单个细胞的方法，其特征在于，包括来源于植入前遗传学检测中患者捐赠的异常囊胚或嵌合体囊胚作为实验材料囊胚；囊胚细胞解离成单个细胞的具体步骤如下：步骤一：囊胚复苏，按照常规囊胚复苏流程对患者捐赠的囊胚进行解冻复苏；步骤二：AccutaseSolution液准备；步骤三：操作皿准备，操作皿的中部设有7.5μLPVP制成的竖条，其竖条外围一侧液滴为AccutaseSolution液制成的若干液滴，液滴靠近PVP条排成一竖排，另一侧液滴为LifeGlobal培养液做成的若干液滴，液滴靠近PVP条排成两竖排，所有液滴均为7.5μL，随后覆盖矿物油，置于37℃且CO2含量为5％的培养箱中备用；步骤四：囊胚去透明带，将囊胚置于操作皿中AccutaseSolution液滴中，固定针在PVP竖条中下针后移入AccutaseSolution液滴中固定囊胚，观察囊胚ICM位置，将ICM内细胞团置于9点方向的位置，在透明带3点方向的位置用激光打孔；随后活检针在PVP中下针后移入AccutaseSolution液滴中，从囊胚3点方向的位置进入，将ICM内细胞团取出，余下部分囊胚TE细胞用活检针直接从透明带中全部取出；步骤五：细胞解离，将操作皿放置于37℃且CO2含量为5％的培养箱中15-25min；步骤六：细胞分散，将ICM细胞和TE细胞团分别转入PVP右边的LifeGlobal培养液液滴中，并作好标记，随后固定针将细胞团吸入固定针针口中，进行吹吸后，细胞即可分散；步骤七：单细胞收集，将分散的细胞直接收集于提前已加入2μLPBS的PCR管中，用于后续分析，其中ICM细胞与TE细胞采用分开收集。

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