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申请/专利权人：西北农林科技大学

摘要：本发明提供了一种基于RPA‑LFD的小麦矮腥黑穗病菌可视化快速检测方法，该方法为：提取小麦麦穗菌瘿冬孢子DNA，得到样品DNA；以S1中得到的样品DNA为模版，按照胶体金试纸条型DNA恒温快速扩增试剂盒的说明书配置反应液，反应液为：冻干粉，Abuffer29.4μL，10μmol·L‑1正向引物TCKRPA‑F2μL，10μmol·L‑1反向引物TCKRPA‑R2μL，0.1μmol·L‑1nfo探针0.6μL，核酸模板2μL,ddH2O11.5μL，Bbuffer2.5μL；在温度为38℃的恒温金属浴中反应10min，反应结束后，吸取10μL反应产物加入超纯水稀释至100μL，取50μL稀释后的反应产物滴于加样孔，5分钟内观察质控线与检测线判断检测结果。本发明利用RPA‑LFD对小麦矮腥黑穗病菌进行高效准确的鉴定，利用RPA技术简化检验检疫流程，使检测结果可视化、实际操作简便化。

主权项：1.一种基于RPA-LFD的小麦矮腥黑穗病菌可视化快速检测方法，其特征在于，该方法为：S1、提取小麦麦穗菌瘿冬孢子DNA，得到样品DNA；S2、以S1中得到的样品DNA为模版，按照胶体金试纸条型DNA恒温快速扩增试剂盒的说明书配置反应液，在温度为38℃的恒温金属浴中反应10min，反应结束后，吸取10μL反应产物加入超纯水稀释至100μL，取50μL稀释后的反应产物滴于加样孔，5分钟内观察质控线与检测线判断检测结果；所述反应液为：冻干粉，Abuffer29.4μL，10μmol·L-1正向引物TCKRPA-F2μL，10μmol·L-1反向引物TCKRPA-R2μL，0.1μmol·L-1nfo探针0.6μL，核酸模板2μL,ddH2O11.5μL，Bbuffer2.5μL；所述正向引物TCKRPA-F的5'-3'的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；所述反向引物TCKRPA-R的5'-3'的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示；所述nfo探针的5'-3'的序列为：TAGGTTCACTCTGTCTCGTTGCTTACCTGG-THF-GTGCCGACGTTACCGC-C3spacer；所述反向引物TCKRPA-R的5'端引入Biotin；结果判读：试纸条质控线出现一条红色条带，检测区没有条带，结果为阴性；若质控线和检测区均出现红色条带，则为阳性，检测到小麦矮腥黑穗病菌Tilletia.controversaKühn；质控线和检测区均无条带，则为无效结果。

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