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申请/专利权人：福建农林大学
摘要：本发明提供了一种大黄鱼转化生长因子‑β1重组蛋白及其应用，属于基因工程技术领域。该重组蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，其编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。本发明构建了高效表达大黄鱼TGF‑β1重组蛋白的大肠杆菌工程菌，利用该大肠杆菌工程菌产生的大黄鱼TGF‑β1重组蛋白，可抑制大黄鱼头肾巨噬细胞中炎症相关因子iNOS和TNFα的表达水平，并抑制巨噬细胞中炎症相关活性物质活性氧和一氧化氮的产生，降低大黄鱼的炎症反应，在作为消除炎症蛋白制剂中具有良好的应用前景。
主权项：1.一种大黄鱼TGF-β1重组蛋白的制备方法，其特征在于：所述大黄鱼TGF-β1重组蛋白的氨基酸序列如序列表中SEQIDNO.4所示，所述大黄鱼TGF-β1重组蛋白的制备方法包括以下步骤：将SEQIDNO.3所示的核苷酸序列克隆到含有融合蛋白标签NusA的大肠杆菌表达载体pET-43.1a中，将得到的重组质粒转化至大肠杆菌（E.coli）Rosetta（DE3）中得到基因工程菌，命名为RosettapET-43.1a-TGF-β1；将RosettapET-43.1a-TGF-β1接种至LB培养液中，于37℃条件下培养，待菌液OD600值至0.6时，加入终浓度为0.5mM的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷，于37℃条件下诱导表达5h，离心收集菌体，加入细菌裂解液重悬，破碎菌体后离心，然后纯化得到目标产物大黄鱼TGF-β1重组蛋白；其中，LB培养液配方为：1wt%蛋白胨+0.5wt%酵母抽提物+1wt%氯化钠+1LddH2O，细菌裂解液配方为：50mMpH8.0Tris缓冲液+500mMNaCl+5%甘油+10mMDTT+0.1~0.2mMPMSF。
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权利要求：
百度查询： 福建农林大学 一种大黄鱼TGF-β1重组蛋白及其应用
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