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一种毛囊修复蛋白组合物及其制备方法和其应用 

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申请/专利权人:北京达尔文细胞生物科技有限公司

摘要:本发明涉及一种毛囊修复蛋白组合物,其制备包括如下步骤:在细胞蛋白提取物中加入20UmL‑35UmL的核酸酶或全能核酸酶的任一种或其组合,将其置于37℃±1℃条件下酶解15min‑40min,将制得的酶解液分离纯化,即得。本发明所得的细胞蛋白提取物、细胞蛋白组合物或其组合物具有修复细胞、受损毛囊细胞的作用,高效修复受损毛囊并显著提升毛囊活性,并具有纯度高、稳定性好、安全有效、有效解决活细胞需要冷藏且其活性受细胞活力时间限制等优点。

主权项:1.一种毛囊修复蛋白组合物,其制备包括下述步骤:(1)在细胞蛋白提取物中加入20UmL-35UmL的核酸酶,将其置于37℃±1℃条件下酶解15min-40min,制得酶解液;(2)在2℃-8℃条件下,将步骤(1)制得的酶解液用洗脱溶剂配置成5-15mgml,过色谱柱,洗脱流速为0.1-1mlmin,监测并收集紫外波长为280nm的洗脱部位,其中,洗脱溶剂由50mmolLpH6.8的磷酸盐缓冲液中含300mmolL氯化钠组成;所述细胞蛋白提取物的制备包括如下步骤:S-1:将密度为5.0×106个mL-1.0×107个mL的间充质传代细胞置于含有DMEMF1240-50%、RPMI164040-50%、牛血清蛋白(BSA)0.1-2%、表皮细胞生长因子(EGF)1-15ugmL、成纤维细胞生长因子(FGF)1-15ugmL、胰岛素转铁蛋白1-15ugmL、复方氨基酸18AA0.01-0.1%和2-10μmolL应激物的培养基中,再将其置于37.0℃±0.5℃、5%±1.0%CO2条件下培养10-60min后,分离,洗涤,收集细胞,其中,所述的应激物为如下化合物:;S-2:将收集细胞按照密度为5.0×106个mL-5.0×107个mL分散于溶剂中,再将其置于2℃-8℃条件下超声处理,制得细胞裂解液,其中,所述溶剂选自生理盐水、5%葡萄糖溶液、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液的任一种或其组合;S-3:将步骤S-2制得的细胞裂解液离心分离后,所得的分离液依次经0.45μm、0.22μm滤膜过滤,即得;所述间充质传代细胞来源于脐带。

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