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申请/专利权人：海南大学三亚南繁研究院
摘要：本发明公开了一种番茄活体花粉的荧光可视化染色方法及其应用。本发明使用碘化‑3,3ˊ‑二乙基氧杂二羰花青、鬼笔环肽、钙荧光白三种染液配合观察，以促进花粉原生质体与花粉壁分离，将多种试剂染色和拍摄过程简化做到一步成像，不仅一次可以观察花粉外壁、花粉内壁和花粉原生质体的状态，且染色反差清晰，具有操作简便、染色效果易控，重复性好，成本低的优点，此染色方法不仅适用于十字花科和茄科作物的花粉，也适用于其他具有类似结构和大小的作物花粉的发育观察和判定。此外，该技术还有望在植物分类、雄性不育系研究以等研究领域发挥重要作用，为植物生殖生物学和作物改良提供了一种新的研究工具。
主权项：1.一种番茄活体花粉的荧光可视化染色方法，其特征在于，所述荧光可视化染色方法所使用的染色液为含1%wv碘化-3,3ˊ-二乙基氧杂二羰花青、100nMFluor488-鬼笔环肽和10%wv钙荧光白的混合液，其中，1%wv碘化-3,3ˊ-二乙基氧杂二羰花青、100nMFluor488-鬼笔环肽和10%wv钙荧光白的体积比为5:3:2；所述1%wv碘化-3,3ˊ-二乙基氧杂二羰花青的溶剂为0.2MPBS缓冲液；所述100nMFluor488-鬼笔环肽的溶剂为0.2MPBS缓冲液；所述10%wv钙荧光白的溶剂为0.2MPBS缓冲液；所述荧光可视化染色方法包括以下步骤：（1）取50μL0.2MPBS缓冲液于载玻片上，然后从花序上摘取需要染色观察的开放花朵或花蕾，并用镊子摘取花药1-2个，直接放入所述载玻片上的PBS缓冲液中，轻轻涂抹花药，散出花粉，随后去除花药；（2）取100μL染色液于所述载玻片上，使所述花粉与染色液混合均匀，然后在25℃，避光环境下染色，静置10min后滴加100μL的0.2MPBS缓冲液缓慢清洗；（3）在载玻片上滴加100μL0.1%wv三乙醇胺、10%vv甘油混合溶液，其中，体积比设置为0.1%wv三乙醇胺:10%vv甘油＝7:1，然后盖上盖玻片，静置1min；（4）采用荧光显微镜观察，物镜放大倍数20倍，目镜放大倍数5倍，使用紫外光激发。
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权利要求：
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