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申请/专利权人：山东维真生物科技有限公司
摘要：本发明涉及一种简单且高效的慢病毒载体文库的构建方法、慢病毒载体文库及其应用。用SfaAI及BsrGI限制性内切酶酶切慢病毒载体，SfaAI和MluI酶切含人源基因的载体获得目的基因片段，在小标签flag‑barcode序列5’加入MluI粘性末端，3’端加入BsrGI粘性末端。将线性化的慢病毒载体骨架、人源基因片段及flag‑barcode标签序列片段混合，获得慢病毒载体。在慢病毒载体骨架上加入puro筛选抗性，基因末端融合flag标签，在各基因后加入不同的barcode条形码。本发明提供的方法实现了慢病毒载体的高通量生产，减少生产成本和时间成本，为后续用慢病毒文库进行基因筛选提供了便捷。
主权项：1.一种慢病毒载体文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、含不同大小基因片段质粒的富集：按照基因片段从小到大排列，每30个为一组，批量提取质粒；S2、对步骤S1提取的质粒进行酶切回收，获得目的片段，同时酶切慢病毒载体，获得线性化载体；S3、根据酶切位点粘性末端，flag以及barcode序列设计得到flag-barcode引物，进一步对flag-barcode正反向引物进行退火，获得退火产物；S4、将步骤S2制得的线性化载体、目的片段及步骤S3获得的退火产物连接起来，并将连接产物转化入大肠杆菌stable化学感受态细胞中；S5、将步骤S4转化完成的菌液置于摇床上复苏，使得载体上的抗性基因得以表达，然后涂布于相应抗性的LB平板上进行筛选，测序验证，即得；步骤S2中所述对步骤S1提取的质粒进行酶切是利用SfaAI和MluI进行酶切，获得目的片段；所述线性化载体是通过用SfaAI和BsrGI酶切慢病毒载体获得的；所述目的片段来源于人源基因。
全文数据：
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百度查询： 山东维真生物科技有限公司 一种简单且高效的慢病毒载体文库的构建方法、慢病毒载体文库及其应用
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