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申请/专利权人：中山大学
摘要：本发明属于基因编辑技术领域，公开了一种植物基因组中定点整合农杆菌T‑DNA的方法及应用。本发明的方法包括：根据CRISPRCas基因编辑系统在目标序列设计向导RNA；构建由CRISPRCas介导的植物基因编辑双元载体；将所述双元载体通过农杆菌浸染法浸染目标植物，筛选抗性阳性植物；依据目标序列设计筛选农杆菌T‑DNA定点插入植株的引物；利用上述引物通过PCR筛选能够扩增出目标产物大小的植株；将所述PCR产物进行一代测序及序列拼接比对，一半为目标序列和一半为T‑DNA序列的拼接序列，则为成功定点整合T‑DNA的植株。本发明可促进外源基因在转基因植物中的稳定表达，避免插入和破坏植物内源基因，便于转基因植物的检测和监管。
主权项：1.一种在植物基因组中定点整合农杆菌T-DNA的方法，其特征在于，包括以下步骤：1根据CRISPRCas基因编辑系统在目标序列设计向导RNA；2构建由CRISPRCas介导的植物基因编辑双元载体；3将所述双元载体通过农杆菌浸染法浸染目标植物，筛选抗性阳性植物；4依据目标序列设计筛选农杆菌T-DNA定点插入植株的引物；5利用上述引物通过PCR筛选能够扩增出目标产物大小的植株；6将所述PCR产物进行一代测序及序列拼接比对，一半为目标序列和一半为T-DNA序列的拼接序列，则为成功定点整合T-DNA的植株。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中山大学 一种植物基因组中定点整合农杆菌T-DNA的方法及应用
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