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申请/专利权人：新疆农业大学
摘要：本发明涉及植物转基因技术领域，尤其涉及一种农杆菌介导的梭梭种子遗传转化体系构建的方法。本发明克服现有技术的不足，提供农杆菌介导的梭梭种子遗传转化体系构建的方法，以梭梭种子为转化受体，通过单因素试验设计，从菌液浓度、农杆菌菌株、侵染时间、共培养时间、AS浓度、抑菌浓度、筛选浓度等影响遗传转化因素的研究，初步建立不经过组织培养的，直接通过侵染梭梭种子的遗传转化体系，通过本发明提供的方法制备得到的抗除草剂梭梭苗，具有生长周期短，操作简单，重复性好等优点。本发明针对高效筛选或繁育优异梭梭种质，改良梭梭种质资源提供技术参考。
主权项：1.一种农杆菌介导的梭梭种子遗传转化体系构建的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取梭梭种子，经75％乙醇和无菌水充分清洗，将清洗之后的梭梭种子浸泡于次氯酸钠溶液中，待梭梭种子泡出表皮之后，取出梭梭种子经无菌水充分漂洗，得到消毒之后的梭梭种子；S2、将S1中制备得到的消毒之后的梭梭种子平铺在无菌滤纸上，对消毒之后的梭梭种子的生长点进行划伤处理，得到处理后的梭梭种子；S3、将S2中制备得到的处理后的梭梭种子放置OD600为0.6的携带pCAMBIA3301载体的GV3101农杆菌重悬液中，经摇床充分浸染，将浸染之后的梭梭种子置于灭菌的滤纸上吸去多余菌液后，移至共培养基中，置于黑暗环境中共培养2d，得到梭梭幼苗；S4、将S3中制备得到的梭梭幼苗移至延迟筛选培养基中培养10～14d；S5、将S4中培养之后的梭梭幼苗移至除草剂抗性筛选培养基中抗性筛选21～28d；S6、对S5中抗性筛选之后的梭梭幼苗经PPT处理，得到抗除草剂梭梭苗，对所述抗除草剂梭梭苗进行PCR和GUS染色检测转化成功植株。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 新疆农业大学 农杆菌介导的梭梭种子遗传转化体系构建的方法
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