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申请/专利权人：北京化工大学
摘要：构建强度范围广泄露表达低的无机磷响应元件库的方法及其应用涉及基因工程技术领域。本发明通过对结构最简单的无机磷启动子PphoA进行结构功能分析，改变上游元件的长度和与结合位点的距离，偶联RBS序列改造，理性设计了32个强度范围在4286‑95740之间梯度分布且泄露表达较低的无机磷响应元件。将本发明的元件应用到高磷条件下藻毒素的降解中，在24小时内实现了87.1％的降解；在低磷条件下，24小时内实现了大肠杆菌细胞90.7％的裂解，确保了改造系统的生物安全性。
主权项：1.构建强度范围广泄露表达低的无机磷响应元件库的方法，其特征在于包括以下步骤：上游序列顺序删除：通过引物PCR技术将基因组中PphoA启动子上游的20bp序列依次删除分别得到了保留11bp、7bp、0bp的启动子，然后使用荧光蛋白mCherry作为报告基因在多功能微孔板检测器中检测荧光强度；上游元件位置测试：通过引物PCR技术将来自rrnB的17bp的上游元件分别引入到结合位点上游0bp、3bp、5bp、7bp的位置，然后使用荧光蛋白mCherry作为报告基因在多功能微孔板检测器中检测荧光强度；RBS序列设计与表征：在设计网站DeNovoDNA中设计6bp不同强度梯度的RBS序列，通过引物PCR技术替换到组成型启动子Pcon的RBS位置,然后使用荧光蛋白mCherry作为报告基因在多功能微孔板检测器中检测荧光强度；组合构建无机磷响应元件库：将上游元件研究中得到的梯度强度启动子与RBS表征得到的梯度序列进行组合，然后使用荧光蛋白mCherry作为报告基因在多功能微孔板检测器中检测荧光强度，表征响应元件的表达目标基因的能力；同时，在不同无机磷浓度下测定组合元件的泄露表达情况，同样使用荧光蛋白mCherry作为报告基因在多功能微孔板检测器中检测荧光强度。
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权利要求：
百度查询： 北京化工大学 构建强度范围广泄露表达低的无机磷响应元件库的方法及其应用
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