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申请/专利权人：北京大学
摘要：本发明公开了一种基因组DNA中8‑氧代鸟嘌呤OG的精准定位方法，利用8‑氧代鸟嘌呤糖基化酶OGG1对OG位点的高特异性识别以及特殊的两步酶切性质，直接将OG位点转化为DNA单链的断裂并且暴露3’磷酸不饱和醛3’‑PUA和5’磷酸5’‑P两种末端，随后利用醛基反应探针对3’‑PUA中的活性醛基进行化学标记，从基因组DNA中特异性富集含有OG位点的DNA片段，最后通过对酶切产生5’‑P末端短链构建DNA文库和二代测序对OG位点进行定位。本发明方法中酶切和化学标记的反应条件温和，对OG位点的富集效率高，而且在特异性标记OG位点的同时通过DNA文库构建策略实现了对OG位点的单碱基分辨率标记，不需要额外的步骤来确定OG位点的位置，使得整个定位检测流程简洁高效，准确性高。
主权项：1.一种基因组DNA中8-氧代鸟嘌呤的精准定位方法，包括以下步骤：1提取基因组DNA并片段化；2用醛基反应试剂封闭基因组DNA片段中的活性醛基；3用8-氧代鸟嘌呤糖基化酶OGG1酶切基因组DNA片段中的OG位点，使OG位点的DNA单链断裂，同时暴露3’-PUA和5’-P两种末端，其中，OG代表8-氧代鸟嘌呤，3’-PUA代表3’磷酸不饱和醛末端，5’-P代表5’磷酸末端；4用醛基反应探针标记3’-PUA末端中的活性醛基并通过亲和纯化捕获标记后的DNA单链片段，没有被标记的5’-P末端的短链和互补链被洗脱下来；5针对洗脱下来的5’-P末端的短链构建DNA文库和进行二代测序，确定OG位点在基因组DNA中的位置。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 北京大学 一种基因组DNA中8-氧代鸟嘌呤的精准定位方法
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