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申请/专利权人：浙江大学杭州国际科创中心
摘要：本发明公开了一种利用果胶的基因工程菌及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。所述基因工程菌以马克思克鲁维酵母为出发菌，基因工程菌中具有多聚半乳糖醛酸水解酶过表达模块。本发明对马克思克鲁维酵母进行基因工程改造，获得多聚半乳糖醛酸水解酶过量表达的基因工程菌，通过对果胶的彻底水解，释放菌体可利用碳源，实现改造后的基因工程菌能够利用水解产物作为碳源用于继续生长。本发明基于马克思克鲁维酵母在SD培养基中具有高效的果胶蛋白酶表达分泌的特性，通过对培养条件优化，利用本发明提供的基因工程菌实现对水果加工废弃物以及排放水中果胶进行低能耗、高附加值的处理。
主权项：1.一种利用果胶的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1构建CRISPR-Cas9质粒：在sgRNA插入位点插入sgRNA序列AGAATCTTGCTGTTCGAAGC，获得靶向切割ABZ1位点的CRISPR-Cas9质粒；2构建同源重组质粒：在同源供体质粒中插入具有ABZ1切割位点上游同源序列、多聚半乳糖醛酸水解酶过表达模块、ABZ1切割位点下游同源序列的基因片段；所述过表达模块含有多聚半乳糖醛酸水解酶编码基因，该编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；3将CRISPR-Cas9质粒和同源重组质粒同时导入马克思克鲁维酵母中，培养筛选获得插入多聚半乳糖醛酸水解酶过表达模块的基因工程菌。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 浙江大学杭州国际科创中心 一种利用果胶的基因工程菌及其构建方法和应用
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