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申请/专利权人：山东大学;广州安金生物科技有限公司;大连医科大学附属第二医院

摘要：本发明提供了一种m6A影响结直肠癌肝转移数据的处理方法、装置及设备，还公开了m6A单位点CRISPR筛选体系建立及其应用，提供了一种用于m6A单细胞CRISPR筛选的gRNA构象、一种构建单细胞水平m6A单位点CRISPR筛选系统的方法、一种构建转录组水平m6A单位点CRISPR筛选系统的方法，通过本发明的方法构建的CRISPR筛选系统能够对结直肠癌肝转移中甲基化显著升高的m6A位点进行大规模的高通量筛选，进而找寻对结直肠癌肝转移起关键作用的m6A位点，为肿瘤预防、精准诊断和精准治疗提供全新视角。

主权项：1.一种m6A影响结直肠癌肝转移数据的处理方法，其特征在于，所述方法包括：获取影响结直肠癌肝转移样本的潜在关键基因集；根据所述潜在关键基因集中的基因名称确定所述潜在关键基因对应的所有转录本信息；确定所有转录本的所有引物序列信息；将所述引物序列信息和所述基因名称相关联，得到相关联后的文件；利用函数处理所述相关联后的文件，得到包含所有转录本的引物序列信息，所述所有转录本的引物序列信息为所述所有的gRNA序列及信息；将所述gRNA序列构建到gRNA载体，得到单个细胞中只转进一条gRNA序列的慢病毒；将所述慢病毒侵染稳定表达m6A定点擦除工具的稳转细胞系，使用Blasticidin药物筛选侵染成功的所述稳转细胞系，得到含有gRNA序列的细胞；所述gRNA载体通过以下方式得到：根据用于单细胞CRISPR筛选中的gRNA序列使用的捕获序列及所在位置，设计M种用于RNA编辑的gRNA构象，从M种所述gRNA构象中筛选出目标gRNA构象；基于所述目标gRNA构象得到改造后gRNA载体；收集所述含有gRNA序列的细胞作为对照组；用治疗结直肠癌的奥沙利铂药物筛选所述含有gRNA序列的细胞，收集筛选后的活细胞作为实验组，提取对照组和实验组的基因组，对基因组做测序分析，得到具有差异表达的m6A甲基化位点的基因作为候选基因集。

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