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申请/专利权人：中国科学院水生生物研究所
摘要：本发明涉及病毒生物学技术领域，尤其涉及一种草鱼GCRV感染模型的建立方法。本发明提供了一种草鱼GCRV感染模型的建立方法，包括步骤：S1病毒的分型鉴定；S2病毒原液的分离、滴度测定和病毒液的制备；S3实验鱼分组和人工驯食；S4拌病毒饲料的制备；S5人工感染及观察统计。本发明采用拌病毒饲料感染实验鱼的方式，模拟了自然感染途径，避免意外伤害，确保了感染病毒后鱼体表型的准确性。此外，本发明还提供了标准化的病毒摄入剂量测定流程和明晰的判断标准，使得模型的重现性好，实验结果可信度高。本发明的方法适用于大规模病毒人工感染实验，在病毒病防控、抗病新品系培育、病毒疫苗研发等领域具有重要应用价值。
主权项：1.一种草鱼GCRV感染模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：S1采集野外自然感染GCRV的病鱼，迅速在-4℃条件下冻存备用，取病鱼的肠组织，提取RNA，进行反转录获得cDNA，利用GCRV三类亚型的特异性引物进行PCR病毒分型鉴定；S2收集所述病鱼的肌肉和内脏组织样本，称重后按照1：3的重量比加入无菌PBS进行匀浆研磨制得病毒悬液，离心取上清液即获得病毒原液，进行反转录获得cDNA，再采用qPCR检测上清液中的病毒滴度，确定病毒滴度后用PBS稀释从而制得病毒液，冻存于-80℃备用；S3选取体重8-10g、GCRV检测阴性的同一家系的健康草鱼，分成实验组和对照组，分别放入不同的养殖缸，水温控制在26-28℃；人工驯食草鱼7-10天，使草鱼能形成条件反射，主动抢食；S4将所述病毒液28℃复苏2小时后，按重量比1：1比例与草鱼膨化饲料混合均匀从而制得拌病毒饲料；S5实验组的养殖缸内投入拌病毒饲料，而对照组的养殖缸内投入拌PBS饲料，所述拌PBS饲料中的PBS剂量与所述拌病毒饲料中的病毒液的剂量相等；每组均每天投喂2次，观察记录死亡数量和症状，直至所有组别连续7天不再出现死亡个体。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国科学院水生生物研究所 一种草鱼GCRV感染模型的建立方法
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