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申请/专利权人:山东省齐鲁细胞治疗工程技术有限公司;银丰生物工程集团有限公司
摘要:本发明属于干细胞培养技术领域,特别涉及一种增强脐带间充质干细胞抗纤维化能力的培养方法及其应用。具体为复苏P1代次的脐带间充质干细胞,经传代培养,待细胞汇合度达到60%~70%后,用无菌的D‑PBS继续培养,培养结束后更换为含有TNF‑β的培养基培养,收集培养上清和细胞。本发明通过因子TNF‑β对脐带间充质干细胞的作用处理,该细胞的旁分泌功能被活化,抗纤维化相关的细胞因子分泌水平显著提高,从而获得更强的抗纤维化能力。相对于现有的技术而言,本发明不涉及基因修饰、外源支架材料和任何可能存在毒副作用的化学药物,操作简便且安全性高。
主权项:1.一种增强脐带间充质干细胞抗肝纤维化能力的培养方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)复苏P1代次的脐带间充质干细胞至培养瓶中;(2)消化P2代细胞,将培养瓶中P2代脐带间充质干细胞进行传代培养;(3)待培养瓶中细胞的汇合度达到标准之后,弃原培养基,用无菌的不含有Mg2+和Ca2+的D-PBS清洗细胞,将完全培养基更换为基础培养基进行培养;(4)培养结束后,用无菌的不含有Mg2+和Ca2+的D-PBS清洗细胞,将基础培养基更换为含有TNF-β的培养基继续培养;步骤(1)中,脐带间充质干细胞的接种密度为8000-10000cellscm2,细胞用量为6×105~7.5×105cells;培养瓶中的培养基为完全培养基;步骤(4)中,所述TNF-β在培养基中的浓度为90ngml。
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