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申请/专利权人：北京帝康医药投资管理有限公司

摘要：本发明公开了一种脱细胞生物网膜制备方法及由其制得的脱细胞生物网膜，其包括如下步骤：1）取新鲜的大网膜组织进行脱脂处理；2）将去除脂肪的大网膜组织振荡浸泡于脱细胞液I中处理；3）将经脱细胞液I处理后的大网膜组织于脱细胞液II中处理；4）将经脱细胞液II处理后的大网膜组织于脱细胞液III中处理；5）将经脱细胞液III处理后的大网膜组织经冷冻干燥后灭菌。本发明的方法操作更为简便，周期更短，通过同时采用特定配方的脱细胞液I、II和III，使得脱细胞网膜中DNA含量更低。

主权项：1.一种脱细胞生物网膜制备方法，其包括如下步骤：1）取新鲜的大网膜组织，于磷酸盐缓冲液中清洗，将清洗后的组织振荡浸泡于脱脂溶液中处理，脱脂溶液浸泡时间为12-36h，振荡频率为150-250rmin；2）将去除脂肪的所述大网膜组织于磷酸盐缓冲液中清洗，并振荡浸泡于脱细胞液I中处理，浸泡时间为6-10h，振荡频率为100-200rmin；3）将经所述脱细胞液I处理后的所述大网膜组织于磷酸盐缓冲液中清洗，并振荡浸泡于脱细胞液II中处理，浸泡时间为6-10h，振荡频率为100-200rmin；4）将经所述脱细胞液II处理后的所述大网膜组织于磷酸盐缓冲液中清洗，并振荡浸泡于脱细胞液III中处理，浸泡时间为6-10h，振荡频率为100-200rmin；5）将经所述脱细胞液III处理后的所述大网膜组织经冷冻干燥后灭菌；其中，脱细胞液的配制步骤如下：1）脱细胞液I：称取十二烷基硫酸钠、RNA酶和脂肪酶，溶解于磷酸盐缓冲液中，其中，十二烷基硫酸钠在磷酸盐缓冲液中的浓度为1.5-2.5%重量比，RNA酶在磷酸盐缓冲液中的浓度为2500-3500UL，脂肪酶在磷酸盐缓冲液中的浓度为1000-2000UL，pH为7.2-7.4，过滤除菌；2）脱细胞液II：称取十二烷基硫酸钠、RNA酶和脂肪酶，溶解于磷酸盐缓冲液中，其中，十二烷基硫酸钠在磷酸盐缓冲液中的浓度为0.6-1.5%重量比，RNA酶在磷酸盐缓冲液中的浓度为1500-2000UL，脂肪酶在磷酸盐缓冲液中的浓度为500-1000UL，pH为7.2-7.4，过滤除菌；3）脱细胞液III：称取十二烷基硫酸钠、RNA酶和脂肪酶，溶解于磷酸盐缓冲液中，其中，十二烷基硫酸钠在磷酸盐缓冲液中的浓度为0.1-0.5%重量比，RNA酶在磷酸盐缓冲液中的浓度为1000-1500UL，脂肪酶在磷酸盐缓冲液中的浓度为300-500UL，pH为7.2-7.4，过滤除菌。

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