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申请/专利权人：南昌大学第二附属医院
摘要：本发明公开了一种用于富集肺癌循环肿瘤细胞的磁分离方法，属于生物技术领域。本发明方法包括磁性纳米粒子与聚‑L‑赖氨酸的偶联，聚‑L‑赖氨酸修饰的磁性纳米粒子复合物与叶酸的偶联，聚‑L‑赖氨酸介导的叶酸修饰的磁性纳米粒子捕获血液中的肺癌循环肿瘤细胞，在外加磁场的作用下，将捕获的肺癌循环肿瘤细胞与血液进行分离等步骤。本发明的磁珠具有良好的生物相容性和分散性，且具有较低的生理毒性，和细胞结合后，具有高效的分离和捕获效果。
主权项：1.一种用于富集肺癌循环肿瘤细胞的磁分离方法，包括以下步骤：1将磁性纳米粒子洗涤后重悬于无菌MES缓冲液中，制得磁性纳米粒子悬浮液；2依次将EDC和NHSS加入至步骤1所得的悬浮液，室温条件下孵育0.5～2.5h，将活化后的磁性纳米粒子再次洗涤重悬，制得活化后的磁性纳米粒子悬浮溶液；3将聚-L-赖氨酸溶于去离子水中，然后加入至步骤2活化后的磁性纳米粒子悬浮溶液，在室温条件下慢速旋转搅拌反应1～3h，对所得的反应产物进行洗涤重悬，最终得到聚-L-赖氨酸修饰的磁性纳米粒子复合物；4将FA-PEG2K-NHS溶于PBS缓冲液中，将步骤3制备得到的聚-L-赖氨酸修饰的磁性纳米粒子复合物加入本步骤制备得到的溶液中，混匀孵育1～4h；然后，在10,000～15,000rpm，5～20min条件下分离、洗涤产物，重悬后得到叶酸～聚-L-赖氨酸～磁性纳米粒子复合物；步骤1所述磁性纳米粒子为市售的工业化羧基磁珠超顺磁性聚合物纳米微球，磁核为四氧化三铁，壳层为聚苯乙烯，表面修饰有羧基官能团，其粒径为50～180nm；步骤3所述聚-L-赖氨酸分子量为4-5kDa。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南昌大学第二附属医院 一种用于富集肺癌循环肿瘤细胞的磁分离方法
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