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申请/专利权人:基因科技(上海)股份有限公司;基因科技(武汉)有限公司
摘要:本发明提供了一种重组人NY‑ESO‑1蛋白的制备方法及其应用。提供了一种重组人NY‑ESO‑1蛋白的制备方法。利用本方法制备NY‑ESO‑1蛋白简化了操作流程,提高了培养产物利用率和重组人NY‑ESO‑1蛋白产率,能够高效表达、生产重组人NY‑ESO‑1蛋白,获得的重组人NY‑ESO‑1蛋白的纯度高、免疫活性高。
主权项:1.一种重组表达人NY-ESO-1蛋白的方法,包括:1提供重组大肠杆菌细胞,所述大肠杆菌细胞中包含重组表达盒,该重组表达盒含有人NY-ESO-1蛋白编码序列;2培养1的重组大肠杆菌细胞,从而表达人NY-ESO-1蛋白,其中不使用化学诱导剂IPTG;表达后进行细胞裂解,获得裂解产物;培养时,首先在37±3℃的温度条件下培养;在培养5±2小时后更换为在17±3℃的温度条件下培养;3利用温和促溶剂处理2的裂解产物;以含有温和促溶剂的纯化缓冲液纯化,获得蛋白纯化产物;其中,所述温和促溶剂包括:0.5~3M尿素,0.2~3%丙醇,10~120mM甘氨酸;4对蛋白纯化产物进行复性,获得活性人NY-ESO-1蛋白。
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