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摘要：本发明公开了一种敲除14‑3‑3ε基因的LMH细胞系及其构建方法和应用，包括如下步骤：设计特异性靶向鸡源14‑3‑3ε基因的sgRNA；构建含有Cas9蛋白基因和特异性靶向鸡源14‑3‑3ε基因的sgRNA的敲除质粒；将构建的敲除质粒对LMH细胞进行转染，筛选培养后获得14‑3‑3ε基因敲除的LMH细胞系。本发明通过CRISPRCas9基因编辑，成功获得鸡源14‑3‑3ε基因敲除LMH细胞系，发现该细胞系能够有效促进血清4型禽腺病毒的感染复制，该细胞系生长活性与正常LMH细胞无明显差异。本发明为探究鸡源14‑3‑3ε生物学功能以及解析14‑3‑3ε在FAdV‑4的感染复制中的作用打下了基础。
主权项：1.一种基于CRISPRCas9敲除14-3-3ε基因的LMH细胞系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1设计特异性靶向鸡源14-3-3ε基因的sgRNA，所述sgRNA位于鸡源14-3-3ε基因的第二个外显子区域，且靶序列唯一；2构建含有Cas9蛋白基因和上述特异性靶向鸡源14-3-3ε基因的sgRNA的敲除质粒；3将步骤2构建的敲除质粒对LMH细胞进行转染，进行筛选培养后，获得14-3-3ε基因敲除的LMH细胞株，经鉴定后，扩大培养，最终获得14-3-3ε敲除的LMH细胞系。
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百度查询： 扬州大学 一种敲除14-3-3ε基因的LMH细胞系及其构建方法和应用
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