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申请/专利权人：杭州师范大学

摘要：本发明公开了一种反硝化活性污泥比周质电子传递链活性检测方法，将反硝化活性污泥用pH7‑8的缓冲液冲洗去除原有底物，再用pH7‑8的缓冲液定容至原反硝化活性污泥体积，重悬至离心管中得到重悬液，超声破碎提取溶解性蛋白；溶解性蛋白与50mM细胞色素c水溶液，10mMNaNO2水溶液混匀，检测反应前后550nm处峰值，计算细胞色素c生物反应前后的含量；根据公式计算反硝化活性污泥比周质电子传递链活性。本发明只需测定还原型细胞色素c的减少量即可衡量下游反硝化酶组成的周质电子传递链活性。对更全面地分析、评价和预测反硝化活性污泥的处理性能至关重要。

主权项：1.一种反硝化活性污泥比周质电子传递链活性检测方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：1将反硝化活性污泥用pH7-8的缓冲液冲洗去除原有底物，再用pH7-8的缓冲液定容至原反硝化活性污泥体积，重悬至离心管中得到重悬液；2重悬液置于冰浴中超声破碎；3将破碎后的悬液10000rpm离心5min，上清液为粗酶，取粗酶过0.45μm的滤膜，取滤液，获得溶解性蛋白；4测定溶解性蛋白浓度，并将其用pH7-8的缓冲液稀释蛋白浓度至100-150mgL，记录稀释倍数x；5取离心管，加入步骤3溶解性蛋白，50mM细胞色素c水溶液，10mMNaNO2水溶液，盖盖后涡旋混匀，迅速取样品，于500-600nm全扫测定吸光值，将550nm处峰值代入标准曲线，计算细胞色素c生物反应前的含量；所述标准曲线是以细胞色素c浓度为横坐标，以相同条件下测得的550nm处吸光值为纵坐标绘制的；6步骤5取样后的离心管于摇床30℃，150rpm反应30min后，取样于500-600nm全扫测吸光值，将550nm处峰值代入步骤5标准曲线，计算生物反应30min后的细胞色素c含量；7另取离心管，加入PBS、50mM细胞色素c水溶液，10mMNaNO2水溶液，于摇床30℃，150rpm反应30min后，取样于500-600nm全扫测吸光值，将550nm处峰值代入步骤5标准曲线，计算生物反应30min后的细胞色素c含量，作为非生物反应的空白对照；步骤6反应30min后的细胞色素c含量减去步骤7非生物反应的空白对照的细胞色素c的含量，即为细胞色素c生物反应后含量；8步骤6取样后的反应液于滤纸过滤后，滤渣放入烘箱，105℃烘干24h，称重，测定固含量SS；采用公式1计算反硝化活性污泥比周质电子传递链活性； 公式1中，ΔCytc为550nm处细胞色素c经生物反应后减少的含量，mM；SS为泥样滤渣脱水105℃烘干后所得固体量，gL；x为稀释倍数；t为培养时间，h；1为转化系数，mole-molCytc。

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