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申请/专利权人：广东海洋大学
摘要：本发明公开了一种用于贝类生长基因的长时程敲降方法、评价及应用，涉及贝类生长基因敲降技术领域，其技术要点为：通过实验前的性状检测和生长标记，贝的处理前麻醉，RNAi探针的合成和注射，以及建立多轴向评价贝壳生长的方法，实现了将敲降的时长延长至30天，且多维度的准确定量评价贝壳生长性能的差异。
主权项：1.一种用于贝类生长基因的长时程敲降方法，其特征是，包括以下步骤：S1.设计引物克隆中间前端，得引物一；S2.提取克隆获得的中间片段的质粒作为PCR扩增的模板，在上下游引物的5’端加上T7启动子序列,得引物二，并对PCR产物进行切胶回收，检测其浓度；S3.使用平末端克隆试剂盒BluntCloningKit连接产物，并导入感受态细胞Trans1-T1中，挑单个菌落，提质粒，使用T7高效反转录试剂盒T7HighEffciencyTranscriptionKit合成RNA后进行纯化，获得dsRNA探针；S4.将马氏珠母贝放入茜素红ARS配置200mgL浓度的海水中浸泡24小时后取出，分别对每只实验贝进行性状测量，测量时以鳞片生长基部为标准；S5.将实验贝浸泡在5％-6％的麻醉剂六水合氯化镁MgCl2·6H2O海水中30min-1h，以开口触碰闭壳肌两次无闭口反应为标准，则完成麻醉，在平滑肌部注射浓度为300ngμL的100uldsRNA，之后分别在第7天、第14天、第21天注射，四次注射采取同样的操作，在取样前测量贝的生长性状；S6.将实验贝放入固定的养殖格中，确保实验前后实验贝位置的对应，在第14天注射前，对开放式养殖的贝体附着物进行清理，清理动作轻柔，不可损伤贝壳。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广东海洋大学 一种用于贝类生长基因的长时程敲降方法、评价及应用
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