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申请/专利权人：江苏创健医疗科技股份有限公司
摘要：本发明公开了一种酵母表达三螺旋结构Ⅲ型重组人胶原蛋白的制备方法及其应用，涉及生物技术领域。该制备方法包括利用工程菌发酵纯化得到所述三螺旋结构Ⅲ型重组人胶原蛋白的步骤；所述工程菌的构建方法包括使用改造后的质粒，构建胶原蛋白表达载体，先进行胶原表达量筛选获得高表达菌株，再向高表达菌株中导入P4H酶表达质粒，获得共表达菌株，经发酵纯化获得成熟的三螺旋结构Ⅲ型重组人胶原蛋白，利用本发明制备方法获得的三螺旋结构的Ⅲ型重组人胶原蛋白含有羟脯氨酸，羟脯氨酸占总脯氨酸的40％以上，可应广泛应用于化妆品、医学美容、医疗器械、生物医学材料等领域。
主权项：1.一种表达三螺旋结构Ⅲ型重组人胶原蛋白的工程菌KM713A1FL-1#-ZS-P4H的构建方法，其特征在于，包括将pMChZ-3A1FL质粒和pPIC9K-P4HDP-1质粒转化入宿主菌，构建得到所述工程菌KM713A1FL-1#-ZS-P4H的步骤；所述pMChZ-3A1FL质粒是将Ⅲ型胶原α1链DNA序列连接入pMChZ-AOX质粒而构建得到；所述pMChZ-AOX质粒是对pPIC9K质粒进行如下改造得到：以核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的DNA分子替代所述pPIC9K质粒的4647-9266bp；将所述pPIC9K质粒中位于αMF前的BamHⅠ及所述αMF通过点突变删除；在所述pPIC9K质粒的1583-1584bp间通过点突变引入BamHⅠ识别位点；所述pPIC9K-P4HDP-1质粒的构建方法包括：以核苷酸序列如SEQIDNO.5所示的DNA分子替换P4H9KDP质粒中的KanR，得到所述pPIC9K-P4HDP-1质粒。
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百度查询： 江苏创健医疗科技股份有限公司 一种酵母表达三螺旋结构Ⅲ型重组人胶原蛋白的制备方法及其应用
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