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申请/专利权人：中国农业大学

摘要：本发明公开了一种创制和繁殖植物隐性核不育系的方法，属于植物生物技术领域。该方法通过对植物隐性核不育基因的编辑和同时互补，快速创制了不育系和保持系。同时，利用在种子和植株颜色标记，实现了不育系和保持系的快速筛选和繁殖。并进一步连锁花粉致死元件，提高了不育系繁殖的效率。由此，建立了一种植物隐性核不育系快速创制和高效繁殖的方法，有效提高了作物杂种优势利用效率。

主权项：1.一种创制和繁殖植物隐性核不育系的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：1敲除植物自交系中的名称为Ms的雄性育性的恢复基因并同时导入名称为Ms-immune的雄性育性的恢复基因，使植物自交系表达所述Ms-immune，得到转基因植株，所述Ms-immune和Ms编码氨基酸序列相同的蛋白质；所述1通过向所述植物自交系中导入名称为Ms敲除元件-Ms恢复元件的DNA分子实现：所述Ms敲除元件-Ms恢复元件由Ms敲除元件和Ms恢复元件连接而成，所述Ms敲除元件含有敲除所述Ms的gRNA基因，所述Ms恢复元件含有所述Ms-immune和驱动所述Ms-immune表达的启动子；所述Ms敲除元件-Ms恢复元件还包含能够调控种子和或植株的外在性状的筛选基因，所述外在性状包含种子颜色和或植株颜色；所述筛选基因为甜菜红素合成系统RUBY元件；所述甜菜红素合成系统RUBY元件由组成型35s启动子的增强元件融合种子糊粉层表达的LTP2启动子p35sEN-LTP2驱动；所述Ms敲除元件-Ms恢复元件还包含花粉致死基因和驱动花粉致死基因的启动子；所述花粉致死基因包括水解花粉中的淀粉致使花粉不育的基因和或降解花粉细胞中RNA而导致花粉死亡的基因，所述水解花粉中的淀粉致使花粉不育的基因编码的蛋白质为由SEQIDNo.2编码的495个氨基酸组成的蛋白质；所述降解花粉细胞中RNA而导致花粉死亡的基因编码的蛋白质为由SEQIDNo.3编码的111个氨基酸组成的蛋白；所述水解花粉中的淀粉致使花粉不育的基因由玉米花粉发育后期表达的特异性启动子PG47驱动；所述植物为玉米或水稻；当植物为玉米时，所述Ms-immune的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示；所述Ms-immune和Ms编码的蛋白质为由SEQIDNo.1编码的412个氨基酸组成的蛋白质；所述降解花粉细胞中RNA而导致花粉死亡的基因由玉米花粉中特异表达的启动子pZm39766驱动；当植物为水稻时，所述Ms-immune的核苷酸序列如SEQIDNo.4；所述Ms-immune和Ms编码的蛋白质为由SEQIDNo.4编码的427个氨基酸组成的蛋白质；所述降解花粉细胞中RNA而导致花粉死亡的基因由水稻花粉中特异表达的启动子pOsEXPB9驱动；所述Ms-immune不含有所述gRNA的靶点序列；2将所述转基因植株进行自交得到种子，依据所述筛选基因的外在性状将所得种子区分为不育系A的种子以及保持系B的种子，完成植物隐性核不育系的创制和或繁殖。

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