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申请/专利权人：华南农业大学

摘要：本发明公开了一种水稻花药长度的取样、保存及测量方法，包括提供水稻材料、在水稻盛花期进行取样、材料取回室内后，及时用保鲜膜包裹放入‑30℃冰箱进行冷冻保存、解剖及拍照、用Image‑ProPlus6.0软件对水稻花药的长度进行测量。该方法可用于大量材料的取样，可同时多人解剖、拍照与测量，快速高效，其保存方法能够使水稻花药保存时间长并保持鲜活的状态。此方法的应用对于水稻花药长度遗传研究、基因定位与克隆、以及生物学功能研究等有着重要的意义。

主权项：1.一种水稻花药长度的取样、保存及测量方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）提供水稻材料；（2）取样：在水稻盛花期，上午未开花前或当日下午闭颖以后，每个材料每个单株均取主穗，此时主穗的状态是穗上部13左右颖花已开花完毕；（3）保存：取回室内后，用保鲜膜包裹放入-30℃冰箱进行冷藏，随用随取；（4）解剖及拍照：解剖前，先将穗子从冰箱中拿出，用湿滤纸包裹放置在室温条件下一段时间，待解冻后，每穗选取8个花药发育成熟的颖花进行解剖；解剖时，先用小剪刀剪掉颖花下端，尽可能将花丝剪短，不要触碰到花药，然后将颖花放入培养皿中，在培养皿底部用70-75%的酒精喷洒薄薄的水层以辅助花药的解剖，用两把尖头镊子进行解剖，每朵颖花均将6枚花药全部解剖出来，将破损的花药剔除，解剖后去掉残渣，将每个花药在培养皿中摆正位置，在连接OPTEC数码相机和电脑的LeicaM205FA体视显微镜下设标尺观察、拍照，在电脑中保存照片；（5）测量：用Image-ProPlus6.0软件对水稻花药的长度进行测量，每个单株至少测量30个数据，取这些数据的平均值作为该单株的花药长度；每个材料测量3株，这3个植株花药长度的平均值为该材料的花药长度；步骤（1）中提供水稻材料为从野生稻单片段代换系文库鉴定出多个长花药的单片段材料，共种植了3个供体来源的7个长花药单片段代换系及受体亲本HJX74、7个纯合二片段聚合系材料；单株插秧，每个材料种植20株，共种植了3个季节；或者步骤（1）中提供水稻材料为普通野生稻单片段代换系材料RA2和受体亲本HJX74，及其回交杂交构建的F2群体219个单株；步骤（2）中所述上午未开花前是上午9：00前、所述下午闭颖以后是下午3：00后；步骤（4）中，所述颖花为稻穗中上部枝梗的第一朵颖花或第三、第四朵颖花；步骤（4）中，所述摆正位置是指此时顺着花药长的方向可看到2个药囊中间的药隔呈一道狭缝；步骤（5）中具体操作步骤为：打开Image-ProPlus6.0测量软件，点击“文件—打开图片所在文件夹—打开待测花药长度的照片—打开标尺—插入单位标尺—设置参数—打开测量—插入线段—逐一测量花药长度—导出EXCEL文档—保存”，即完成测量。

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