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申请/专利权人：河南工业大学

摘要：本发明公开了一种富含糖脂类表面活性剂体系中脂肪酶活力的测定方法。利用微生物合成糖脂类生物表面活性剂过程中，在培养发酵所得发酵液中加入有机溶剂进行萃取，然后超声处理、离心分离；分离后所得含有脂肪酶的水相用超纯水进行稀释，取稀释后的水相与反应底物进行混合、反应，加入无水乙醇终止反应，然后离心、测定410nm下的吸光度并计算得到对硝基苯酚浓度；最后根据脂肪酶活力计算公式计算得到脂肪酶活力。采用本发明测定含糖脂的酶液中脂肪酶活力，测得酶活与不含糖脂类表面活性剂的体系中脂肪酶活力基本无差别，表明本发明方法对含糖脂类表面活性剂的酶液中酶活测定有广泛适用性和稳定性。

主权项：1.一种富含糖脂类表面活性剂体系中脂肪酶活力的测定方法，其特征在于，所述测定方法包括以下步骤：1利用微生物合成糖脂类生物表面活性剂过程中，在培养发酵所得发酵体系即发酵液中加入有机溶剂进行萃取；2萃取后进行超声处理；3超声处理后进行离心分离；4将分离后所得含有脂肪酶的水相用超纯水进行稀释，取稀释后的水相与反应底物进行混合，然后在70℃下水浴反应10min，接着加入无水乙醇终止反应，12000rmin条件下离心5min，410nm下测定吸光度并计算对硝基苯酚p-NP浓度；所述稀释时的倍数记为n，加入反应体系的水相体积记为V0，反应底物的体积记为V1，无水乙醇的体积记为V2；所述410nm下测定吸光度记为OD410；所述对硝基苯酚的浓度记为Cp；对硝基苯酚p-NP浓度的计算公式：Cp＝OD410-ba；其中：Cp—体系中的对硝基苯酚p-NP的浓度，μmolL；OD410—体系在410nm下测定的吸光度；b—为吸光值与对硝基苯酚p-NP浓度标准曲线中的截距；a—为吸光值与对硝基苯酚p-NP浓度标准曲线中的斜率；5脂肪酶活力的计算：脂肪酶活力计算公式：其中：X—样品中脂肪酶活力，UmL；Cp—反应结束后体系中的对硝基苯酚p-NP浓度，μmolL；V—反应体系总体积V0+V1+V2，μL；V0—反应体系中加入含有脂肪酶的水相体积，μL；n—含有脂肪酶的水相稀释倍数，反应后的OD410超过1.2需要将脂肪酶液进行稀释，如未稀释，则n为1；10—反应时间，min；1000—UL到UmL的转换系数。

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